探针法人型支原体实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Hominis

货号：Mqt-hom-20      规格：20个反应

货号：Mqt-hom-50      规格：50个反应

货号：Mqt-hom-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1， 特异性检测人型支原体，与其他生物基因组没有交叉反应。

2， 灵敏度高，低检测限为每反应7个拷贝。

3， 使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4， 带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

5， 带有UDG酶和dUTP，可降低残留DNA的污染。

人型支原体（Mycoplasma Hominis）是种多形性革兰氏阴性菌，可呈球形、丝状和不规则形状，小直径约80至100纳米，大直径约0.5至1微米，平均直径约0.2至0.3微米，是种人类常见的条件性支原体，可发现于人类和灵长类动物。人型支原体可作为共生菌生活在泌尿生殖道，在呼吸道也可发现其存在。它在宿主中营寄生和腐生生活，能引起多种感染，如：盆腔炎症，流产后发热，产后发热，免疫抑制人群的外生殖器感染，以及新生儿的脑膜炎、肺炎和脓肿等。人型支原体有三种能量产生途径，包括糖酵解、精氨酸水解和核黄素代谢。

体外培养法是传统的人型支原体检测方法，但这个方法相对较慢，需2-5天时间，灵敏度较低，容易受到其他微生物的污染，有时需要繁琐的显微观察。这些缺点往往造成严重的时间浪费。而PCR法用于检测人型支原体，则有更高的灵敏度和更好的特异性，不受其他微生物污染的影响，且检测时间短，仅需几个小时即可获得结果。定量PCR法与常规PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒选择高度保守的膜蛋白移位酶基因作为靶点，可以特异性识别人型支原体，经BLAST验证，与其他生物基因组没有交叉反应。检测13种支原体和31种细菌，无特异性反应。在153个泌尿生殖道样品中，检测出108个人型支原体阳性，而培养法第次检测出98个阳性，用冻存样本重复检测后证实另10个也为阳性，可见本试剂盒灵敏度高于培养法。以gap基因和16S rRNA基因为靶点的PCR方法，由于这两个基因在靶点区域有些小的突变，导致些菌株不能识别或灵敏度降低，而本试剂盒的靶点区域，经数十个菌株的测序证实不包含突变。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

UDG和dUTP可以阻止次步骤残余DNA的扩增。dUTP可以确保扩增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可从单链或双链DNA上去除尿嘧啶残基，从而阻止含有尿嘧啶的DNA作为下几轮PCR的模板。在PCR循环开始的UDG孵育步骤，可以破坏带有尿嘧啶的PCR产物。经过该去除污染步骤后，UDG在正常的PCR循环过程中被高温灭活，对PCR反应没有影响。

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