使用荧光标记TrueBlot二抗则可避免这些情况，特异地检测出免疫沉淀而得的抗原(如下图）。

当使用IP分离蛋白时，捕获抗体与目标蛋白质结合（Step 1），添加Protein A 或Protein G 包被的磁珠以固定抗体-目标蛋白质复合物（Step 2）并洗掉不需要的材料（Step 3）。常规IP中的后步骤通常包括使用加热和还原/变性剂使蛋白质变性（Step 4）。

当洗脱的IP样品通过SDS-PAGE分离（Step 5），后续Western blot中使用的相同抗进行检测，然后分别使用常规二抗和TrueBlot^TM二抗检测时，结果表面：使用常规二抗检测时，捕获抗体的重链和轻链都可以检测到（Step 5 右图），这可能会掩盖您感兴趣的蛋白，特别是如果它的大小与IgG重链或轻链相近时，使用TrueBlot^TM二抗检测时，只检测到特异性的目的蛋白（Step 5 左图）。

由结果可知：用传统的HRP标记二抗检测时会出现轻链和重链条带，而用荧光标记TrueBlot^TM二抗检测时则没有，表明TrueBlot^TM二抗仅识别天然（非还原）状态的抗，消除重链和轻链条带的干扰，以为免疫沉淀样品提供准确、出版质量的WB结果。

荧光标记TrueBlot二抗特点：：

1、完全排除的免疫沉淀用抗重轻链的干扰，结果清晰、准确，特异性强；

2、使用简单，仅将传统的二抗替换成TrueBlot^TM系列二抗即可。

荧光标记TrueBlot二抗注意要点：

1、需对免疫沉淀物进行彻底还原；

2、免疫印迹时需用牛奶作为封闭液，而不能用BSA(牛血清白蛋白)，因为后者的封闭作用不强。

3、当用Rabbit IgG TrueBlot^TM对免疫印迹膜进行检测时，要先用anti-IgG微球来进行免疫沉淀步骤，而不能使用Protein A或Protein G微球，因为后者与Rabbit IgG有很强的亲合力，会引起污染。

来源：https://www.amyjet.com/featured/Rockland-TrueBlot.shtml