艾美捷Abbexa 质粒 MiniPrep 试剂盒套件内容：

零件 50 次 200 次

重悬缓冲液 (RB) 15 毫升 60 毫升

裂解缓冲液 (LB) 15 毫升 60 毫升

中和缓冲液 (RB) 20 毫升 80 毫升

洗涤缓冲液 (WB) 10 毫升 2 × 20 毫升

洗脱缓冲液 (EB) 5毫升 10 毫升

核糖核酸酶 A (10 毫克/毫升) 150 微升 600 微升

带收集管的小型质粒离心柱 50 2×100

艾美捷Abbexa 质粒 MiniPrep 试剂盒检测程序：

1、通过将整个 RNase 小瓶添加到重悬缓冲液瓶中来制备工作重悬缓冲液。充分混合并储存在 2-8 °C 之间。

2、通过向每个洗涤缓冲液瓶中加入 100% 乙醇来制备工作洗涤缓冲液：40 ml (50 rxns)；或 2 × 80 ml (200 rxns)。搅拌均匀。

3、将过夜培养的细菌悬浮液添加到微量离心管中。测量 LB 培养基体积并记下下表中所需的试剂体积。

LB培养基 工作重悬缓冲液  裂解缓冲液  中和缓冲液

≤ 5 毫升 250 微升 250 微升 350 微升

5-10毫升 500 微升 500 微升 700 微升

10-15 毫升  750 微升  750 微升  1050 微升

15-50 毫升  1000 微升  1000 微升  1400 微升

4、以 10,000 × g 离心 1 分钟。弃去上清液。

5、根据上表，将适量的工作重悬缓冲液（与 RNase A 预混合）添加到细胞沉淀中，并通过移液器将其完全重悬。

6、根据上表添加适量的裂解缓冲液（蓝色液体）。将试管倒置 4-6 次，立即彻底混合。裂解液应从不透明变为亮蓝色。

7、在完成第 6 步后的 5 分钟内，根据上表添加适量的中和缓冲液（黄色液体）。通过颠倒试管 4-6 次彻底混合。中和完成后，裂解液将变为黄色，并形成淡黄色沉淀。让裂解物在室温下静置 2 分钟。

8、以 12,000 × g 离心 5 分钟。将上清液转移到离心柱中。

9、以 12,000 × g 离心 1 分钟。丢弃流过。

10、向柱中加入 650 µl 工作洗涤缓冲液（加乙醇），然后以 12,000 × g 离心 1 分钟。丢弃流过。

11、将空柱以 12,000 × g 离心 1-2 分钟，以完全去除任何残留的洗涤缓冲液。

12、将离心柱放入干净的微量离心管中，然后将 30-100 µl 洗脱缓冲液或无菌蒸馏水 (pH > 7.0) 直接添加到柱基质的中心。为获得更高的产量，请将洗脱缓冲液或水预热至 65 °C）。让色谱柱在室温下静置 1 分钟。以 10,000 × g 离心柱 1 分钟以洗脱 DNA。分离的质粒 DNA 可以立即使用，也可以储存在-20°C。

注：

1、在室温下进行所有离心步骤。

2、使用，请检查 Lysis Buffer 溶液是否混浊。如果浑浊，将瓶子在设置为 37 °C 的水浴中加热，以确保所有内容物都完全溶解。使用后立即拧紧瓶盖以避免 pH 值变化。

3、该试剂盒的zui 大 DNA 产量为 40 µg。如果质粒 DNA 产量低，增加细菌培养量。

4、使用上述建议的工作重悬缓冲液、裂解缓冲液和中和缓冲液的体积，因为过多的细胞培养会导致不完全裂解，从而影响质粒 DNA 的产量和纯度。

5、5 ml LB 培养基相当于 1 次 rxn。

Abbexa研究涵盖抗、二抗、蛋白质、ELISA试剂盒、酶以及其他用于研究的试剂盒和工具。无论是进行学术研究，药物开发，疾病研究还是其它生物学研究，Abbexa的单克隆抗体，多克隆抗体，蛋白质和生物试剂均旨在促进科研工作者的研究。艾美捷科技是Abbexa的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Abbexa.shtml