支原体检测试剂盒中的PCR技术快速（结果通常在不到3小时内获得）且易于使用。工具包也高度敏感，可在100µL测试样品上清液中检测到低至2-5毫微克的支原体DNA。真核生物的并且来自细胞培养上清液的细菌DNA不被试剂盒扩增。感染支原体的样本细胞系将在琼脂糖凝胶上产生约448bp至约611bp的PCR产物，具体取决于支原体的类型。包括阳性对照（M.orale，503bp），以验证PCR扩增过程具有以及确认在测试样品中获得的PCR产物的大小。还提供内部控制以消除与PCR抑制剂相关的潜在假阴性。

艾美捷支原体检测试剂盒建议的方案：

•试剂制备

o离心所有组件管，以确保材料完全沉降到底部

o使用不含DNase的水重新配制底漆/dNTP混合物、阳性和内部对照，如下所示-

底漆/dNTP混合物-260µL

阳性对照-200µL

内部控制-200µL

o涡流5，以确保充分混合并在室温下平衡5分钟

o涡流，然后再次离心

o重组试剂应储存在-20°C或以下；避免多次冷冻/解冻循环

•样品制备

o将100μL细胞培养上清液*转移到无菌的200μL PCR管中；确保盖子密封严实，以防

蒸发

o将样品上清液在95°C下加热5分钟

o以大速度快速旋转样品上清液5，以去除细胞碎片；上清液现在

准备加入PCR主混合物

*该试剂盒为从细胞培养上清液中检测支原体而设计。对于血清或细胞裂解物样品，DNA

建议在测试提取，以避免PCR抑制。

•热循环计划

•PCR主混合

•琼脂糖凝胶电泳

•凝胶评价

•如果样品的PCR被抑制，则可以通过进行DNA分析来轻松去除抑制剂

艾美捷支原体检测试剂盒样本数据：

相关文献：

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来源：https://www.amyjet.com/products/13100-01.shtml