有的人，做了200多次磷酸化蛋白，出结果的只有60几次，与理论致的只有40次不到。令人崩溃。。。

现实情况确实如此，内源性目的蛋白本身在细胞裂解物中表达丰度不高，而其磷酸化修饰的蛋白含量就更低了！即使用高浓度抗体，延长曝光时间，依旧很难获得理想的效果。大多数市售的WB封闭剂（如牛奶，血清，BSA）虽然可以满足阻断膜上的未反应位点，减少检测过程中非特异性抗体的数量，但它们并不是为了在印迹过程中保护磷蛋白抗原而设计的，本身含有磷酸化蛋白成分，因而并不能为磷酸化WB雪中送炭！

接下来就说下解决方案吧~

艾美捷 Cell Biolabs丨磷酸化抗体用：PhosphoBlocker封闭液。

艾美捷 Cell Biolabs丨PhosphoBlocker封闭液特点：

1.与奶粉，血清，BSA相比，更卓越的封闭效果

2.同时，可作为抗体稀释液使用，无需单独购买

3.增强低水平的磷蛋白信号而不增加背景

4.在Western Blot期间保留磷蛋白抗原

5.易于使用的预混合干混合物

艾美捷 Cell Biolabs丨PhosphoBlocker 效果对比：

Fig. A549细胞裂解液，检测磷酸化-p38蛋白.

Cell也在用的磷酸化抗体用封闭液：

Orthofer, Michael, et al. "Identification of ALK in Thinness." Cell181.6 (2020): 1246-1262.

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