MyBioSource  艾美捷 肠激酶活性检测试剂盒－－利用含有肠激酶特异性识别序列且带有AFP荧光标记的多肽底物，在肠激酶的催化作用下，该多肽底物被裂解，并释放AFC分子，继而通过测量其在Ex/Em = 380/500 nm的荧光强度，达到检测肠激酶活性的目的。

AFC标准曲线（a）。用人肠肽酶检测试剂盒（b）的灵敏度。按照试剂盒方案进行分析。

MyBioSource 艾美捷该试剂盒化验程序：

1.AFC标准曲线：通过向90µl肠肽酶分析缓冲液中添加10µl 1 mM AFC标准溶液，将AFC标准溶液稀释至100µM（100 pmol/µl）。将0、2、4、6、8和10µl稀释的100µM AFC标准加入96孔板中的系列孔中，以生成0、200、400、600、800和1000 pmol/孔的AFC标准。用肠肽酶分析缓冲液将终体积调节至100µl。

2.样品制备：在96孔板的每个孔中加入1-50微升具有肠肽酶活性的样品。将5-10µl肠肽酶（阳性对照）添加到所需孔中。用肠肽酶分析缓冲液将阳性对照和样品孔的终体积调节至50µl。平行制备带有50µl肠肽酶分析缓冲液的底物背景控制井和带有样品+肠肽酶分析缓冲液的样品背景控制井。

3.反应混合物：混合足够多的试剂，以满足要进行的分析数量。对于每个孔（样品、阳性对照和背景对照），制备50µl混合物，其中包含：

                   Reaction Mix                        Background Control Mix

Enteropeptidase Assay Buffer 48 µl 50 µl

Enteropeptidase Substrate 2 µl －－-

4.测量：室温下培养30-60分钟，在Ex/Em=380/500 nm下测量荧光。

注：培养时间取决于样品中的肠肽酶活性。建议在动力学模式下测量荧光，并在线性范围内选择两个时间点（T1和T2）来计算样品的肠肽酶活性。AFC标准曲线可在终点模式下读取（即在培养时间结束时）。

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