背景资料：

在单克隆抗体药物的纯化过程中，以蛋白A（Protein A）为基础的亲合层析是广泛应用的纯化方法，单克隆抗体可以有效的在此步骤中得到纯化。蛋白A 的初来源是细菌（Staphylococcus aureus）细胞壁中的一个蛋白质，研究表明蛋白A 可能对人体有潜在的危害，它的生物学作用包括刺激人体多种细胞素（IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4）的释放。由于在蛋白A 亲合层析柱使用过程中会有微量的蛋白A 从层析柱上脱落下来，因此用灵敏的方法来确证单克隆抗体药物中蛋白A 的残留处于一个较低的和稳定的水平是单克隆抗体药物的质量标准。

蛋白A (Protein A) 酶联检测试剂盒是用来定量分析生物药物中蛋白A杂质的试剂盒。先，用不同浓度的蛋白A标准蛋白制作一条标准曲线，然后再根据标准曲线来分析生物药物中残留蛋白A的含量。

具体方法为：先将蛋白A标准蛋白或者待测样品适当稀释后加入已包被好抗蛋白A抗体的96孔平板中。经过1.5小时的保温，蛋白A与已经固定在平板上的抗体结合形成抗原－抗体复合物。此复合物被随后加入的生物素标记的抗蛋白A的抗体结合并进一步形成更高的复合物，反应45分钟后洗去未结合的物质。再加入链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物（Streptavidin-HRP Conjugate），静置30分钟。因链霉亲合素可以与任何带生物素标记的抗体相结合，从而使链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物连接到平板上。接下来冲洗掉未结合的物质，加入TMB底物。固相上的酶催化底物产生颜色反应，待颜色反应一段时间后，终止反应。用酶标仪在450 nm波长下测定其结果，此结果能间接地反应结合到平板上的蛋白A数量的多少。根据蛋白A标准曲线定量分析生物药物中残留蛋白A的含量。

艾美捷Protein A残留检测试剂盒：

Protein A ELISA kit

编号：ADI-900-057

规格：96 Wells（可做37个样本！）

样本类型：含有天然或者重组Protein A的中性缓冲液（无物种限制）

检测方法：比色法，450 nm

组分：Microtiter plate, Conjugate, Antibody, Assay buffer 13, Wash buffer concentrate,Standard, TMB Substrate, S solution 2

保存条件：蓝冰运输；收到货后4℃保存（切勿冰冻）

仅用于科研实验.

艾美捷Protein A残留检测技术信息说明：

对来自金黄色葡萄球菌(M)的天然蛋白 A、来自大肠杆菌(R) 的重组蛋白 A、来自大肠杆菌(G)的重组半胱氨酸蛋白 A和重组耐碱蛋白 A的不同蛋白 A 构建体的检测识别对来自大肠杆菌(S) 的变体进行了测试，所得浓度从试剂盒标准曲线中插值并显示在所提供的图中。

图：煮沸后不同蛋白 A 构建体的测定识别。从试剂盒标准曲线内插得到的浓度。通过将观察到的浓度除以预期浓度来计算回收率百分比。A：来自金黄色葡萄球菌(Millipore)的天然蛋白A，n=9；B：来自大肠杆菌(Repligen)的重组蛋白A，n=9；C：来自大肠杆菌(GE)的重组半胱氨酸蛋白A ，n=12；D：来自大肠杆菌的重组抗碱性蛋白 A 变体（来自 GE 的 MabSelet SuRe），n = 12；图形数据代表统计平均值 +/- 1 标准偏差。

来源：https://www.amyjet.com/products/ADI-900-057.shtml