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EZ细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒
点击次数：4发布时间：2019/2/26 12:48:26
更新日期：2019/3/27 9:32:56
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
产品名称：EZ细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒
英文名称：EZ Cell ａnd Tissue DNA Direct PCR Kit
产品规格：50T/200T
产品价格：420/1350元
试剂盒产品用途：
动物组织或细胞DNA的扩增与克隆、转基因细胞株筛选、DNA病毒基因扩增、DNA病毒普通PCR诊断、DNA病毒Real-time PCR诊断（Taqman法）等。
试剂盒组成：
DNA-EZ-1、DNA-EZ-2、DNA-EZ-3、2×TaqMix、H2O
保存条件：
-20ºC保存。使用前将DNA-EZ-1、DNA-EZ-3在室温或37ºC充分溶解。DNA-EZ-2和2×TaqMix需置于冰上。
使用方法：
1、细胞或组织样品中DNA的扩增
1 将DNA-EZ-1与DNA-EZ-2以5：1的比例充分混合。
2 取20 µL细胞样品（105-106 cells/mL）或研磨的组织样品，加入6 µL上述混合液，混匀。
3 置于50ºC静置10分钟后，再置于95ºC加热10分钟。
4 加入50 μL的DNA-EZ-3，混匀。
5 取2 μL上述处理液进行PCR扩增。
2、组织块中DNA的扩增
1 用H2O将DNA-EZ-1稀释5倍，每25 μL的DNA-EZ-1稀释液加入1 μL的DNA-EZ-2，混合均匀。
2 切取半颗米粒大小的组织块（< 3 mm3），并完全浸入上述混合液中。
3 50ºC加热30分钟，每隔10分钟取出混匀一次。
4 95ºC加热10分钟。
5 加入50 μL的DNA-EZ-3，混匀。
6 取2 μL上述处理液进行PCR扩增。
3、Real-time PCR
取上述细胞或组织处理液，加入特异性引物和Taqman探针，可进行特异性靶标DNA的绝对定量检测。
取上述细胞或组织处理液，加入SYBR Green PCR试剂（需自备），可进行特异性靶标DNA的相对定量检测。
4、PCR加样体系
| 成分 | 25 μL体系（推荐） | 50 μL体系 |
| 2×TaqMix | 12.5 μL | 25 μL |
| Forward Primer (10 μM) | 1 μL | 2 μL |
| Reverse Primer (10 μM) | 1 μL | 2 μL |
| Template DNA | 2 μL | 2 μL |
| H2O | 8.5 μL | 19 μL |
5、PCR程序设定
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min |
|
| 变性 | 94 ℃ | 30 s |
30-35 |
| 退火 | 50~72℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 1 kb/min | |
| *终延伸 | 72 ℃ | 10 min |
|
|
| 4℃ | Hold |
|
（1）取样的细胞量应当适中，浓度不宜过高或过低，处理后溶液应当以透明为宜。
（2）样品处理过程中应当防止交叉污染，推荐设置阴性对照参与处理过程，以检测环境的污染。
（3）PCR的退火温度可根据引物的预测Tm值减去5ºC，或者通过梯度PCR摸索较佳退火温度。
（4）上述步骤同样适用于相应的细胞或组织中DNA病毒的PCR诊断。在进行组织中DNA病毒的诊断时，为保证准确度，推荐将病料组织研磨后再进行上述处理和扩增。
（5）TaqMix中加入了染料和相应试剂，普通PCR后可直接进行电泳，无需另加Loading buffer。
（6）处理96孔板中的细胞时，可如“组织块DNA扩增”第1步中的方法，配置裂解液后，使用排枪直接加入96孔板裂解细胞，实现高通量操作。
（7）TaqMix中的染料不影响Taqman探针的效果。
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