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EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒（一步法）
点击次数：5发布时间：2019/2/26 12:54:01
更新日期：2019/3/27 9:32:56
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
产品名称：EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒（一步法）
英文名称：EZ Cell ａnd Tissue RNA Direct PCR Kit（One Step)
产品规格：30T/100T
产品报价：1200元/3000元
试剂盒应用：细胞组织或细胞基因的扩增与克隆、RNA病毒基因的扩增、RNA病毒PCR诊断、RNA病毒Real-time PCR.。
试剂盒组成：RNA-EZ-1、RNA-EZ-2、RNA-EZ-3、RNA-EZ-4、RT-Enzyme、2*RT-Buffer、ddH2O
保存条件：-20ºC保存。使用前将RNA-EZ-1、RNA-EZ-4在室温或37ºC充分溶解。RNA-EZ-3、RNA-EZ-4和RT-Enzyme使用时需置于冰上。
使用方法：
细胞中RNA的扩增
（1）将6ul RNA-EZ-1与3ul RNA-EZ-2充分融合。
（2）取20ul细胞悬液（10^5-10^6cells/ml）,加入上述混合液，混匀。
（3）置于37ºC静置10分钟。
（4）加入1ul RNA-EZ-3，混匀。
（5）置于37ºC静置15分钟。
（6）置于98ºC加热5分钟。
（7）加入60ul的RNA-EZ-4，混匀。
（8）取2ul（7）中处理液进行RT-PCR扩增。
组织块中RNA的扩增
（1）用 H2O 将 RNA-EZ-1 稀释 5 倍，每 25 μL 的 RNA-EZ-1 稀释液中加入 3 μL 的 RNA-EZ-2，混合均匀。同时处理多个组织块时，可以按照以上比例配制预混液并分装到每个离心管 26 µL。
（2）切取半颗米粒大小的组织块（< 3 mm3），完全浸入上述混合液中。
（3）置于 37ºC 静置 10 分钟。
（4）加入 1µL RNA-EZ-3，混匀。
（5）置于 37ºC 静置 15 分钟。
（6）置于 98ºC 加热 5 分钟。
（7）加入 60 μL RNA-EZ-4，混匀。
（8）取 2 μL（7）中处理液进行 RT-PCR 扩增。
Real-Time PCR
取上述细胞或组织处理液，加入特异性引物和 TaqMan 探针，可进行特异性靶标 RNA 的绝对定
量检测。如需进行 SYBR Green Real-time PCR，请选择 EZ021-01/-02（EZ® Cell ａnd Tissue RNA Direct
PCR Kit（One Step)）。
在 RNase free 的离心管中配制 PCR 反应体系
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| 25 μL 体系（推荐） | 50 μL 体系 |
| 2×RT-Buffer | 12.5 μL | 25 μL |
| RT-Enzyme | 1 μL | 2 μL |
| Forward Primer (10 μM) | 1 μL | 2 μL |
| Reverse Primer (10 μM) | 1 μL | 2 μL |
| Template DNA | 2 μL | 2 μL |
| RNase free ddH2O | 7.5 μL | 17 μL |
按照以下方法设定 PCR 反应
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 反转录 | 50 ℃ | 30 min |
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| 预变性 | 94 ℃ | 3 min |
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| 变性 | 94 ℃ | 30s | 30-35 |
| 退火 | 50-72 ℃ | 30s | 30-35 |
| 延伸 | 72 ℃ | 30s-3min（1 kb/min） | 30-35 |
| *终延伸 | 72 ℃ | 10min |
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| 4 ℃ | Hold |
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（1）取样的细胞量应当适中，浓度不宜过高或过低，处理后溶液应当以透明为宜。
（2） 样品处理过程中应当防止交叉污染，推荐设置阴性对照参与处理过程，以检测环境的污染。
（3）用本产品扩增的 RNA 不宜太长，1000bp 及以内的片段*佳，前期研究中可扩增长达 1800bp的片段，扩增片段越长效率越低。扩增的成功率也与 RNA 的丰度、二级结构以及引物等有关。
（4）本产品同样适用于相应的细胞或组织中 RNA 病毒的 PCR、Real-Time PCR 诊断。
（5）2×RT-Buffer 中加入了染料和相应试剂，可直接进行电泳，无需另加 Loading buffer。
（6）处理 96 孔板中的细胞时，可按照 ddH2O:RNA-EZ-1:RNA-EZ-2=20:5:3 的比例配制预混液，使用多道移液器直接加入 96 孔板经 DPBS 洗涤的细胞中，实现高通量操作。
（7）2×RT-Buffer 中的染料不影响 TaqMan 探针的效果。
