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常用细胞固定剂及其优缺点比较
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上传时间：2019/8/15 17:11:03
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上 传 者：上海远慕生物科技有限公司
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1、95%酒精：*常用的细胞学固定液，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，但核蛋沉淀后，能溶于水，因此，经95%酒精固定的涂片，染色前没有必要经过水洗。此固定液适用于苏木素-伊红染色和巴氏染色。固定时间根据标本的不同，时间也不尽相同，一般标本固定时间为15-30分钟，痰标本需要更长一些时间。经过95%酒精固定的标本，细胞核保存较好，结构清晰，颜色鲜艳。如果在95%酒jing液内加入聚乙二醇更佳，可以保护细胞免受空气干燥后的人工假象。
2、乙mi酒jing液（1：1）：其效果与95%酒精相似，但由于乙mi有很强的吸水性和特有的刺激性气味，容易挥发，长期低浓度吸入，有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多等不良反应。长期皮肤接触，可发生皮肤干燥、皲裂。所以现在已经逐渐被95%酒精所代替。
3、甲醇：固定时间快，细胞收缩小，细胞核保存较好，结构清晰，染色鲜艳。常作为穿刺细胞涂片的固定液。对抗原保存较好，可作为细胞涂片免疫组化的固定液。缺点是具有挥发性和毒性，大量接触与吸入对中枢神经有一定的伤害。甲醇的毒性与其代谢产物甲醛和甲酸的蓄积有关。以前认为毒性作用主要为甲醛所致, 甲醛能抑制视网膜的氧化磷酸化过程, 使膜内不能合成ATP,细胞发生变性,*后引起视神经wei缩。近年研究表明,甲醛很快代谢成甲酸,急性中毒引起的代谢性酸中毒和眼部损害，主要与甲酸含量相关。
4、冰醋酸：5%水溶液可作固定用。不能沉淀白蛋白，但能沉淀核蛋白。渗透性强，固定快，能使红细胞膨胀而破碎，常与其它液体配合使用。
5、无水酒精： 对糖原保存较好，容易使细胞收缩，其性能与95%酒精相似，很少单独使用，一般只用于糖原的固定。
6、丙酮:为易挥发的无色液体,有刺激性气体。可使蛋白质沉淀,渗透性强,细胞收缩严重,对核的固定差。很少用于常规细胞学的固定。广泛用于酶组织化学中的各种酶的固定,也有人用于抗原的保存,作为细胞涂片免疫组化的固定液。丙酮具有挥发性和毒性,大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害。
7、Carnoy 固定液:配方:无水乙醇60ml,氯fang30ml,冰醋酸10ml
Carnoy液能固定胞浆和胞核,尤其适宜于染色体等。常用于糖原及尼氏体的固定,由于冰醋酸能溶解红细胞并可防止细胞由酒精引起的过渡收缩,对固定有血的标本和显示DNA、RNA效果很好。缺点是每次固定后固定液内有大量的红细胞碎片和细胞脱落,必须及时过, 否则容易造成污染。其次,氯fang具有挥发性和毒性,大量接触与吸入对肝、肾及中枢神经有一定的伤害。
8、10%中性缓冲甲醛液:
配方1:40%甲醛10ml,0.01mol/L pH7.4的PBS90ml。
配方2:40%甲醛120ml,蒸馏水880ml,磷酸二氢钠(NaH2PO4;H2O)4g,磷酸氢二钠(Na2HPO4) 4g,磷酸氢二钠(Na2HPO4)13g。
10%中性缓冲甲醛液对大多数抗原保存较好,是免疫组织化学*常用的固定液,组织穿透好,组织收缩较小。但此液体不适合固定湿固定的涂片,可作为干固定涂片和细胞蜡块的定液。甲醛也具有挥发性和毒性。大量吸入会出现呼吸道的严重刺激和水肿、眼刺痛、头痛,也可发生支气管哮喘。经常吸入少量甲醛,能引起慢性中毒, 出现粘膜充血、皮肤刺激症、过敏性皮炎、指甲角化和脆弱、甲床指端疼痛等。全身症状有头痛、乏力、胃纳差、心悸、失眠、体重减轻以及植物神经紊乱等。
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