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远慕生物讲解:细胞培养常见问题解答
点击次数：331 发布时间：2018/8/21
培养液 pH 值变化太快
可能原因：1，CO2 张力不对。
2，培养瓶盖拧得太紧。
3，NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足。,
4，培养液中盐浓度不正确
5，细菌、酵母或真菌污染
建议解决方法：1）按培养液中 NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度，2.0g/L 到 3.7g/L 浓度 NaHCO3 对应 CO2 浓度为 5％ 到 10％。
2）改用不依赖 CO2 培养液。
松开瓶盖 1/4 圈。
3）加 HEPES 缓冲液至 10 到 25mM 终浓度。
在 CO2 培养环境中改用基于 Earle′s 盐配制的培养
液，在大气培养环境中培养改用 Hanks 盐配制的培养
液。
4）丢弃培养物。
5）或用抗生素除菌。
可能原因：1，培养液出现沉淀，但pH值不变
,2，用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来,
3，可能原因：冰冻保存培养液 用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌。
将培养液加热到 37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，
丢弃培养液。
培养细胞死亡
可能原因：1，培养箱内无 CO2,2，培养箱内温度波动太大,3，细胞冻存或复苏过程中损伤,4，培养液渗透压不正确,5，培养液种有毒代谢产物堆积,6，检测培养箱内 CO2
建议解决方法：1）检查培养箱内温度
2）取新的保存细胞种
3）检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受
4）渗透压为 260 – 350 mOsm/kg。加入额外试剂如 HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。
5）换入新鲜培养液
