产品展示
磷酸钙法细胞转染试剂盒保存条件
点击次数：32发布时间：2017/12/4 15:50:03
更新日期：2019/11/22 17:19:13
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：磷酸钙法细胞转染试剂盒
优质供应
详细内容
中文名： 磷酸钙法细胞转染试剂盒
供应商：上海远慕
规格：200T
分类：细胞其他
保存温度：—20℃
有效期：12个月
用途：用于磷酸钙法转染细胞,适合于大多数贴壁细胞的转染。
说明：HEK293是*适合磷酸钙法转染的细胞,优化条件后转染效率可以高达85%以上,一般的转染效率可达40～50%左右。注意无菌操作。
远慕生物是家代理生产与销售科研试剂为一体的老牌商家，为客户提供优质的不同系列试剂，包含有：ELISA试剂盒，液体试剂，动物血清血浆，细胞培养，生物试剂，生化试剂，化学试剂，培养基，蛋白质，实验耗材，进口试剂，标准品对照品，抗体，染色液，缓冲液，溶液，其他实验试剂等，如有需要，欢迎订购！
磷酸钙法细胞转染试剂盒操作流程：
贴壁细胞转染：
1、 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中， 待细胞密度大70～80%满时即可进行转染。后续操作步骤均按6孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
2、 在加入DNA之前2～4h，加入2ml不含抗生素的完全培养液，置于37℃ 5% CO2培 养箱培养。
3、 取DNA(体积不宜超过20μl)加入100μl Calcium chloride solution，混匀，即为 DNA-CaCl2溶液。
4、 取BBS solution 100μl，用移液器一边吹打BBS solution，一边逐滴加入DNA-CaCl2 溶液(操作缓慢，一般在1～2min)。
5、 室温静置20～30min，即为DNA-CaCl2-BBS溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
6、 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物质均匀加入到6孔板细胞中，轻轻晃动混匀。
7、 置于37℃ 5% CO2培养箱培养。
8、 去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入2ml完全培养液继续培养，一般24h后可见 转染细胞的表达。
悬浮细胞转染：
1、 低速离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤1次。
2、 取DNA(体积不宜超过20μl)加Calcium chloride solution，混匀，即为DNA-CaCl2 溶液。
贴壁细胞转染：
1、 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中， 待细胞密度大70～80%满时即可进行转染。后续操作步骤均按6孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
2、 在加入DNA之前2～4h，加入2ml不含抗生素的完全培养液，置于37℃ 5% CO2培 养箱培养。
3、 取DNA(体积不宜超过20μl)加入100μl Calcium chloride solution，混匀，即为 DNA-CaCl2溶液。
4、 取BBS solution 100μl，用移液器一边吹打BBS solution，一边逐滴加入DNA-CaCl2 溶液(操作缓慢，一般在1～2min)。
5、 室温静置20～30min，即为DNA-CaCl2-BBS溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
6、 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物质均匀加入到6孔板细胞中，轻轻晃动混匀。
7、 置于37℃ 5% CO2培养箱培养。
8、 去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入2ml完全培养液继续培养，一般24h后可见 转染细胞的表达。
悬浮细胞转染：
1、 低速离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤1次。
2、 取DNA(体积不宜超过20μl)加Calcium chloride solution，混匀，即为DNA-CaCl2 溶液。
3、 取BBS solution，用移液器一边吹打BBS solution，一边逐滴加入DNA-CaCl2溶液。
4、 室温静置，即为DNA-CaCl2-BBS溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
5、 每106个细胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新悬浮室温放置。
6、 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的完全培养基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物质均匀 加入到6孔板中，轻轻晃动混匀。 7、 置于37℃ 5% CO2培养箱培养，去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入2ml完全 培养液继续培养，一般24h后可见转染细胞的表达。
磷酸钙法细胞转染试剂盒注意事项：
4、 室温静置，即为DNA-CaCl2-BBS溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
5、 每106个细胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新悬浮室温放置。
6、 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的完全培养基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物质均匀 加入到6孔板中，轻轻晃动混匀。 7、 置于37℃ 5% CO2培养箱培养，去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入2ml完全 培养液继续培养，一般24h后可见转染细胞的表达。
磷酸钙法细胞转染试剂盒注意事项：
1.转染时，把DNA-氯化钙溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化钙溶液中。
2.高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280大于1.8，并且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。
3.在用磷酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的*佳浓度为3%左右。
4.BBS溶液的pH值直接关系到转染效率，尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。
5. 转染时由于质粒不同、细胞不同，*佳的质粒用量需自行摸索。
