细菌总数BT/大肠菌群FCB/腐生菌TGB/铁细菌FEB/硫酸盐还原菌SRB测试瓶

杨先生 189 1158 7484   188 1008 2884

 一、产品品种：

细菌总数测试瓶（BT）
大肠菌群测试瓶（FCB）
腐生菌测试瓶（TGB）
铁细菌测试瓶（FEB）
硫酸盐还原菌测试瓶（SRB）
二、方法原理：
采用绝迹稀释法，即用无菌注射器将待测定的水样逐级注入到测试瓶中，进行接种稀释后，置于培养箱培养，根据测试瓶阳性反应和稀释的倍数，计算出水样中细菌量总数。
三、操作步骤：
① 将同一品种测试瓶排成一组，依次编上序号（按照估计的细菌量确定测试瓶个数，建议参考数值为：X×100的细菌量用3个测试瓶、X×101的细菌量用4个测试瓶、X×102的细菌量用5个测试瓶、X×103的细菌量用6个测试瓶）。
做二个平行样重复试验时应排为二组；做三个平行样重复试验时应排为三组。
② 用无菌注射器取1ml代表性水样（采样方法依据GB/T12997-1991、GB/T12998-1991、GB/T12999-1991、GB/T14581-1993的规定进行）注入1号瓶内稀释，充分振摇，待用（平行样亦按此操作，下同）；

1
③ 用另一支无菌注射器从1号瓶内抽取0.5 ml经充分振摇后的水样注入2号瓶内稀释，充分振摇，待用；
④ 再用一支无菌注射器从2号瓶中内抽取0.5ml经充分振摇后的水样注入3号瓶内稀释，充分振摇，待用；
⑤ 依次类推稀释直到*后一瓶为止，待用。
⑥ 将上述所有稀释过的测试瓶放入恒温培养箱中培养，按表1进行细菌生长的鉴别。

表1　　细 菌 生 长 的 鉴 别 方 法
细菌瓶品种规格型号培养温度培养 时间阳性反应特征
细菌总数测试瓶KBC—BT37±2℃24±2h瓶中液体由红变黄、或液体混浊、或液体表面出现菌膜、或液体底部出现沉淀。
大肠菌群测试瓶总大肠菌群KBC—TCB37±2℃
24±2h
瓶中液体由紫红变黄
粪大肠菌群KBC—TCB44±2℃
腐生菌测试瓶KBC—TGB现场采样温度±3℃24±2h瓶中液体由红变黄
铁细菌测试瓶KBC—FEB 24瓶中液体棕色褪去，生成棕色或黑色沉淀
硫酸盐还原菌测试瓶KBC—SRB 7H瓶中无色液体变黑或生成黑色沉淀
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四、细菌量计量：
1．在一定温度下培养一定时间后，按瓶号列出稀释梯度，并根据细菌瓶阳性反应的个数，确定生长指标和级数（参见附录及示例）．
2．根据生长指标查表2或表3，确定细菌量基数并乘以级数，即为细菌量总数。
细菌量总数＝细菌量基数×级数
二组平行样重复试验查表2
三组平行样重复试验查表3
3、细菌量总数结果报告示例见表4
五、注意事项
1、测试瓶中若有白色沉淀为过量营养成份，属正常现象，不影响测试。
2、常温条件下，测试瓶储存有效期为一年。
3、测试瓶经稀释后，一定要用力振摇1~2分钟，以保证测试结果的准确性。


表2 二 次 重 复 细 菌 量 基 数 表
生 长
指 标细菌量 基数 （个/ml）生 长
指 标细菌量 基数 （个/ml）生 长
指 标细菌量基数 （个/ml）生 长
指 标细菌量 基数 （个/ml）生 长
指 标细菌量基数 （个/ml）
0000.00200.91112.02015.022025.0
0010.51000.61202.02106.022170.0
0100.51011.21213.021113.0222110.0
0110.91101.32002.521220.0







3
例2、 
①√ ②√ ③√ ④ ⑤ 
①／√ ②／√ ③／√ ④／ ⑤／ 
①＂√ ②＂√ ③＂ ④＂√ ⑤＂ 
+++－－
+++－－
++-+-
321 

即 



则此生长指标为321，级数为1。查三次重复计数表。321对应的细菌量为15个/ml。此系列报告结果为：15×101=150个/ml。
例3、
① ②√ ③ ④ ⑤ 
①／√ ②／√ ③／√ ④／ ⑤／ 
①＂ ②＂ ③＂ ④＂ ⑤＂ 
-+－－-
+++－－
－－－－-
121

即 




则此生长指标为121，级数<0。查三次重复计数表。121对应的细菌量为1.5个/ml。此系列报告结果为：≤1.5×100既≤1.5个/ml。
例4、 ①√ ②√ ③√ ④√ ⑤√ 
①／√ ②／√ ③／√ ④／√ ⑤／√ 即 
①＂√ ②＂√ ③＂√ ④＂ ⑤＂ 
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附录
一、生长指标的确定原则．
1．全部呈阳性反应的*后一列平行样应为生长指标的位数．
2．同一平行样，有Ｘ个阳性反应瓶，生长指标即为Ｘ．

二、级数的确定原则
1．全部呈阳性反应的*后一列平行样的瓶号数减去1，即为级数ｎ，以10＇ｎ表示．
2．1号瓶的2或3个平行样未全部发生阳性反应时，级数为0＇，即为10＇0＇


示例1
① ② ③ ④ ⑤
+ - - - -
+ + - - -
+ + + - -
生长指标：　3　　2　1

级　　数：　10＇0＇　　（①－1＝0＇）

示例2

① ② ③ ④ ⑤
+ + + - -
+ + + - -
+ + + + +
生长指标：　　　　　3　　1　1
级　　数：　10＇2　（③－1＝2）



5
示例3　

①　　②　　③　　④　　⑤
+　　　+　　-　　　+　　-
+　　　+　　+　　　-　　-
生长指标：　　　　2　　1　　1
级　　数：　10＇1　（②－1＝1）

示例4　

① ② ③ ④ ⑤
- + - - -
+　 -　 +　 -　 -
生长指标：1　 1　1
级　　数：　10＇0＇　


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细菌测试瓶测试方法及结果报告示例
例、做三个平行样重复试验，每个样稀释5个梯度：
① ② ③ ④ ⑤ 
①／ ②／ ③／ ④／ ⑤／
①＂ ②＂ ③＂ ④＂ ⑤＂
即分别在① ①／①＂号瓶中注入0.5ml水样，摇匀后取出0.5ml再分别注入② ②／②＂号瓶中；摇匀后取出0.5ml再分别注入到③ ③／③＂号瓶中，依次类推，直至⑤ ⑤／⑤＂号瓶。
在恒温下放置一定时间后（大肠菌群37℃，24小时）观察测试瓶阳性（变色）反应个数。
例1、（打√者为阳性反应－－-以+表示） 
①√ ② ③ ④ ⑤ 
①／√ ②／√ ③／√ ④／ ⑤／ 
①＂√ ②＂√ ③＂ ④＂ ⑤＂ 
+－－－－
+++－－
++－－-
321

即



则此生长指标为321，级数为0。查三次重复计数表。321对应的细菌量为15个/ml。此系列报告结果为：15×100=15个/ml。






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阳性反应，报告结果应注明“≥”，（如例5）。此情况下说明细菌量大，应增加测试瓶的个数，以求得较准确的结果。
⑤ 测试瓶注入水样（稀释）后应用力振摇，以保证结果的准确性；逐级稀释水样时，应更换无菌注射器，以保证结果的准确性。




10
+++++
+++-+
+++－－
31 2

即 





则此生长指标为312，级数为2。查三次重复计数表。312对应的细菌量为11.5个/ml。此系列报告结果为：11.5×102个/ml。
例5、①√ ②√ ③√ ④√ ⑤√ 
①／√ ②／√ ③／√ ④／√ ⑤／√ 即 
①＂√ ②＂√ ③＂√ ④＂√ ⑤＂√

+++++
+++++
+++++
300
即





则此生长指标为300，级数为4。查三次重复计数表。300对应的细菌量为2.5个/ml。则此系列报告结果为≥2.5×104个/ml。
注意事项：
① 做几个平行样对应查几次重复计数表（即生化检测方法中的MPN表）。
② 计算公式为：瓶号数-1=级数n，即在结果后应 ×10n。
如 1号瓶级数为0级，即在结果后×100；
2号瓶级数为1级，即在结果后×101；
3号瓶级数为2级，即在结果后×102；
③ 全部阳性反应的*后一列应为生长指标的第1位数。
如例1中的生长指标第1位数3对应① ①／①＂号瓶
例2中的生长指标第1位数3对应② ②／②＂号瓶
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例4中的生长指标第1位数3对应③ ③／③＂号瓶
依次类推。
④ 如果列（① ①／①＂号瓶）未全部发生阳性反应，报告结果应注明“≤”，如例3；如果至*后一列（⑤ ⑤／⑤＂号瓶）全部发生阳性反应，报告结果应注明“≥”，（如例5）。此情况下说明细菌量大，应增加测试瓶的个数，以求得较准确的结果。
⑤ 测试瓶注入水样（稀释）后应用力振摇，以保证结果的准确性；逐级稀释水样时，应更换无菌注射器，以保证结果的准确性。




10
+++++
+++-+
+++－－
31 2

即 





则此生长指标为312，级数为2。查三次重复计数表。312对应的细菌量为11.5个/ml。此系列报告结果为：11.5×102个/ml。
例5、①√ ②√ ③√ ④√ ⑤√ 
①／√ ②／√ ③／√ ④／√ ⑤／√ 即 
①＂√ ②＂√ ③＂√ ④＂√ ⑤＂√

+++++
+++++
+++++
300
即





则此生长指标为300，级数为4。查三次重复计数表。300对应的细菌量为2.5个/ml。则此系列报告结果为≥2.5×104个/ml。
注意事项：
① 做几个平行样对应查几次重复计数表（即生化检测方法中的MPN表）。
② 计算公式为：瓶号数-1=级数n，即在结果后应 ×10n。
如 1号瓶级数为0级，即在结果后×100；
2号瓶级数为1级，即在结果后×101；
3号瓶级数为2级，即在结果后×102；
③ 全部阳性反应的*后一列应为生长指标的第1位数。
如例1中的生长指标第1位数3对应① ①／①＂号瓶
例2中的生长指标第1位数3对应② ②／②＂号瓶
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反应，报告结果应注明“≥”，（如例5）。此情况下说明细菌量大，应增加测试瓶的个数，以求得较准确的结果。
⑤ 测试瓶注入水样（稀释）后应用力振摇，以保证结果的准确性；逐级稀释水样时，应更换无菌注射器，以保证结果的准确性。