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小鼠白介素6（IL-6）定量分析酶联免疫检测试剂盒
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上传时间：2015/12/25 9:53:43
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上 传 者：劲马免疫学第三方检测中心
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小鼠白介素6（IL-6）定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-6 浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与上海劲马生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。如您有其它需求，请登录上海劲马生物科技有限公司网站或致电本公司。
IL-6简介：
白介素6（IL-6）是一类多功能的蛋白，在宿主防御，急性期反应，免疫反应，造血功能，神经系统等方面起到重要的作用。根据来源不同，白介素6分子量从21到28kDa不同，但均为单链蛋白。白介素6在多种细胞中都有表达，如T细胞、巨噬细胞、纤维原细胞、肝细胞、血管内皮细胞等。由于IL-6具有不同的活性，所以IL-6也被称为干扰素β2(IFN-β2)、B细胞刺激因子-2(BSF-2)、杂交瘤细胞生长因子、肝细胞刺激因子、毒性T细胞分化因子、巨噬细胞粒细胞诱导因子(MGI-2A)等。白细胞介素6在B-细胞向Ig分泌细胞的转化过程起到重要的作用，参与了淋巴细胞和单核细胞的分化，诱导神经细胞在B-细胞，T-细胞，肝细胞，造血干细胞以及中枢神经系统的分化作用。此外，肌肉运动收缩作用后白细胞介素6会被释放到血液中，进而能促进脂肪的分解并改善机体的胰岛素耐受性。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-6的浓度。小鼠IL-6捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IL-6会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-6抗体后，抗小鼠IL-6抗体与小鼠IL-6接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。*后加入显色剂，若样本中存在IL-6将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，小鼠IL-6浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-6浓度。
小鼠定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分规格
预包被板12条或6条
样本分析缓冲液1瓶5ml/3 ml
标准品稀释液10ml/5ml
标准品2/1支(冻干)
生物素化抗体1瓶10ml/5ml
HRP连接的酶结合物1瓶10ml/5ml
浓缩洗涤液20× 30ml/瓶
TMB底物1瓶10ml/5 ml
终止液1瓶5ml/3 ml
封板胶纸3/2张
说明书1份
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作：
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；
B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；
D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；
3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除；
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
注：正常小鼠血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.若标准品复溶后，请在三天内用完。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应，请严格控制在25～28℃。
9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡20 分钟；每次检测后剩
余试剂请及时于2～8℃保存。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3. 标准品:加入去离子水1ml至冻干标准品瓶中使IL-6终浓度达到1000pg/ml，静置15分钟后轻轻混悬待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，浓度为1000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。*后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头； 2.酶标仪； 3．自动洗板机； 4．去离子水或双蒸水；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB 显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次，且*后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60分钟。
6.洗板5次，且*后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20分钟。
8.洗板5次，且*后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml 典型OD值1 典型OD值2 OD平均值
0 0.1123 0.1279 0.1201
31.25 0.3321 0.3764 0.35425
62.5 0.4143 0.4545 0.4344
125 0.5423 0.5761 0.5592
250 0.9524 0.9803 0.96635
500 1.4201 1.5021 1.4611
1000 2.1121 2.2231 2.1676
注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度，特异性和重复性:
1.灵敏度：多次重复结果表明，*小检出量为2.8pg/ml。
2.特异性：与大鼠IL-6,人IL-6没有交叉反应。
3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-6 浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整, 如有疑问请与上海劲马生物科技有限公司联系，我们将提供力所能及的帮助。如您有其它需求，请登录上海劲马生物科技有限公司网站或致电本公司。
IL-6简介：
白介素6（IL-6）是一类多功能的蛋白，在宿主防御，急性期反应，免疫反应，造血功能，神经系统等方面起到重要的作用。根据来源不同，白介素6分子量从21到28kDa不同，但均为单链蛋白。白介素6在多种细胞中都有表达，如T细胞、巨噬细胞、纤维原细胞、肝细胞、血管内皮细胞等。由于IL-6具有不同的活性，所以IL-6也被称为干扰素β2(IFN-β2)、B细胞刺激因子-2(BSF-2)、杂交瘤细胞生长因子、肝细胞刺激因子、毒性T细胞分化因子、巨噬细胞粒细胞诱导因子(MGI-2A)等。白细胞介素6在B-细胞向Ig分泌细胞的转化过程起到重要的作用，参与了淋巴细胞和单核细胞的分化，诱导神经细胞在B-细胞，T-细胞，肝细胞，造血干细胞以及中枢神经系统的分化作用。此外，肌肉运动收缩作用后白细胞介素6会被释放到血液中，进而能促进脂肪的分解并改善机体的胰岛素耐受性。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-6的浓度。小鼠IL-6捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IL-6会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-6抗体后，抗小鼠IL-6抗体与小鼠IL-6接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。*后加入显色剂，若样本中存在IL-6将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，小鼠IL-6浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-6浓度。
小鼠定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分规格
预包被板12条或6条
样本分析缓冲液1瓶5ml/3 ml
标准品稀释液10ml/5ml
标准品2/1支(冻干)
生物素化抗体1瓶10ml/5ml
HRP连接的酶结合物1瓶10ml/5ml
浓缩洗涤液20× 30ml/瓶
TMB底物1瓶10ml/5 ml
终止液1瓶5ml/3 ml
封板胶纸3/2张
说明书1份
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作：
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；
B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；
D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；
3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除；
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
注：正常小鼠血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.若标准品复溶后，请在三天内用完。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应，请严格控制在25～28℃。
9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温平衡20 分钟；每次检测后剩
余试剂请及时于2～8℃保存。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3. 标准品:加入去离子水1ml至冻干标准品瓶中使IL-6终浓度达到1000pg/ml，静置15分钟后轻轻混悬待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，浓度为1000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。*后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头； 2.酶标仪； 3．自动洗板机； 4．去离子水或双蒸水；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB 显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次，且*后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温孵育60分钟。
6.洗板5次，且*后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温孵育20分钟。
8.洗板5次，且*后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD 值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml 典型OD值1 典型OD值2 OD平均值
0 0.1123 0.1279 0.1201
31.25 0.3321 0.3764 0.35425
62.5 0.4143 0.4545 0.4344
125 0.5423 0.5761 0.5592
250 0.9524 0.9803 0.96635
500 1.4201 1.5021 1.4611
1000 2.1121 2.2231 2.1676
注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度，特异性和重复性:
1.灵敏度：多次重复结果表明，*小检出量为2.8pg/ml。
2.特异性：与大鼠IL-6,人IL-6没有交叉反应。
3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.
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