ELISA的发展史:

3√ ELISA试剂盒它使我们对以一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举,并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。

如:检测限、灵敏度以及显色时间等,请依据试剂盒内说明书进行实验操作,网站电子版说明书仅作参考。

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ELISA实验步骤及注意事项

1、固相载体选择

聚苯乙烯:具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。

聚氯乙烯:聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。

良好的ELISA板应该是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之间、同一板各孔之间性能相近。

2、包被

①板孔的选择:ELISA别的微孔板。

②抗体选择:选择支持ELISA实验的抗体,根据推荐浓度稀释或摸索适浓度。

③包被缓冲液:pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液。

④包被温度:2-8 ℃过夜包被或室温(37℃)包被2h。

⑤包被浓度:包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。

3、封闭

①包被之后一定要立即封闭(封闭非特异性抗体)。

②选择效果较好的封闭剂(细胞培养BSA、Tween等)。

4、加样及孵育

①加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。

②孵育的时间及温度参考试剂盒说明书。如有条件,建议加样孵育时使用shaker震荡仪,推荐轨道直径3mm,转速在500±50rpm。

③检测抗体、酶标物的稀释比例、孵育温度、孵育时间严格根据说明书提示。

④洗板对于ELISA来说,是其关键的一步,保证ELISA的特异性。

⑤封板膜一定要一次一换,切勿二次甚至多次使用,以防交叉污染。

5、显色和终止

①使用需检查,底物在加入96孔板之应为无色透明。

②显色底物需现配现用,避免污染。

③孵育时间,说明书上为参考范围,具体需要根据实验条件自行摸索。可参考标曲浓度 孔的颜色,变为蓝色较明显时即可。

实验器材使用小技巧

1、塞瓶口时消毒,右手拇指、食指塞进胶皮内,将塞旋入消毒瓶口内,瓶口再消毒瓶直           立火焰方,双手拇指、中指固定瓶位,双手食指将胶皮外翻,后用消毒纸包装

3、瓶管、盖的使用要求同塞,需使用同一盖使用面放在酒精棉球上,套盖,盖使用面                    火焰消毒

化学实验室守则:
1. 实验室要保持安静,严禁大声喧哗、吵闹。
2. 在实验,要预先作好实验准备,进入实验室时,要有秩序,按规定的座位就座。
3. 实验,必须了解清楚实验内容、目的、要求和实验步骤。
4. 实验开始时,应先查点仪器、产品是否齐全,不得随意调换,如发现问题,及时报告。
5. 实验必须按步骤进行,并仔细观察,做好记录,实验后后及时写好实验报告。
6. 实验时,要爱护仪器,节省产品,由于违反操作规程而损坏丢失的仪器,必须赔偿。
7. 实验结束,要将仪器整理或清洗,保持桌面,室内的整洁后才能离开。

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