使用说明书

试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被白蛋白（ALB）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

ELISA：本法主要用于检测型特。该现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测。下面以AP2型的ELISA检测法为例介绍其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 用200μl缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加工作量1:4稀释被检猪100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加100μl工作量兔抗AP2型 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑦ 用ELISA检测仪测定OD值。本试验同时设阴、阳性对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。

样品收集、处理及保存

2.  ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

4.  组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

1. 酶标仪（450nm）

3. 37℃恒温箱

结果判断： 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

绵羊Smad同源物1(Smad1/MADH1)ELISA试剂盒

操作注意事项

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

试剂的

洗板

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

5.  弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

实验原理：试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠4壬烯醛(4-HNE)捕获的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的小鼠4壬烯醛(4-HNE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒性能

2.  灵敏度检测浓度小于1.0 mg/mL。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

6.  有效期：6个月

免责声明

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司