使用说明书

试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被白蛋白（ALB）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

双夹心：本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病（IBDV）的双夹心ELISA为例介绍本法的操作程序。① 加包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干③ 加酶标 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟，加终止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

样品收集、处理及保存

2.  ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

4.  组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

1. 酶标仪（450nm）

3. 37℃恒温箱

竞争ELISA：此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射测定。其基本程序为：① 包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA检测仪测定OD值。被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合。此外，试验中应用酶标抗原的量较多。

绵羊内皮型一氧化氮合成酶(NOS3/eNOS)ELISA试剂盒

操作注意事项

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

试剂的

洗板

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

5.  弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

双夹心ELISA：此法与双夹心ELISA的主要区别在于：它是采用酶标抗检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种，还可试验的性。此法的基本程序为：① 加（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特（Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加入酶标抗Ab-2（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。

试剂盒性能

2.  灵敏度检测浓度小于1.0 mg/mL。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

6.  有效期：6个月

免责声明

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司