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聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体(proton sponge)，因此，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成带正电荷的复合物颗粒，该颗粒与细胞表面阴离子结合，很容易通过内吞作用进入细胞；并且可抵御溶酶体的降解作用，从而提高核酸分子的表达水平。

查找：线性聚乙烯亚胺 分子量40000 @资料已更新

CAS
49553-93-7

分子式
(C2H5N)n . xHCl

分子量
40,000 (~22,000 free base)

熔点
73-75℃

溶解性
溶于冷水

不溶于
常用有机溶剂（乙醇、丙酮、四氢呋喃）

形式
白色固体粉末

生物毒性
未知

安全防护
手套，护目镜，口罩

存储
粉末至少可以保存一年， PEI内含自由氨基，建议开封后4℃干燥保存，减缓氧化过程。

运输
常温运输

特点
大量实验数据反馈，细胞通用性好，有非常好的转染效果，尤其对293，CHO细胞系有特别显著的转染效果。

转染操作流程：(贴壁细胞转染方法)

1. 接种细胞： 转染一天，用胶原酶（BIOHUB Cat#78CL1002)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔加入的细胞量参考下图表1，一般18-24小时（sf9细胞为3-4小时）后转染。转染时细胞汇合度应至少达到 70~80%以上。转染更换为含5%血清的生长培养基。

2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤需先使其升至室温。用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。 （稀释PEI和DNA的体积为培养体积的1/10-1/20, DNA浓度为1ug/ml）

3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。转染4-6小时（sf9细胞为2小时 )后，更换为生长培养基。

4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后 7 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定 检测时间。

5. 转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。 天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

转染操作流程：(悬浮细胞转染方法)

1. 转染准备：悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中，合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度（例100mL培养瓶，1X10 6 cells/mL），然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4小时后可以进行转染。

2. 准备 DNA-PEI 复合物：DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤需先使其升至室。用Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无血清培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每1μg DNA需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25 min以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

3. 转染细胞：将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。

4. 孵育细胞和分析结果：转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定 检测时间。

5. 如果要获得更多的蛋白产量，有文献表明转染后24小时，可以适当稀释细胞，稀释比例参考范围（1:2—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与 稀释比率应根据经验确定。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司