使用说明书

试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被白蛋白（ALB）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

点ELISA：与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特不够高等。该的主要操作程序为：⑴载体膜的预处理及抗原包被　取纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使纤维素膜干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封闭　将纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被检　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶标，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。⑸显色　加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。⑹ 结果判定　以阳性、阴险作为对照，膜片出现深棕红色点者为阳性反应，否则为阴性反应。

样品收集、处理及保存

2.  ：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

4.  组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

1. 酶标仪（450nm）

3. 37℃恒温箱

本试剂盒采用双夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被捕获的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。

兔基质金属蛋白酶原1(Pro-MMP-1)ELISA试剂盒 29

操作注意事项

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

试剂的

洗板

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

5.  弃去，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

 绘制曲线：在Excel工作表中，以品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

实验原理：试剂盒采用双一步夹心法酶联吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠4壬烯醛(4-HNE)捕获的包被微孔中，依次加入标本、品、HRP标记的检测，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的小鼠4壬烯醛(4-HNE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒性能

2.  灵敏度检测浓度小于1.0 mg/mL。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

6.  有效期：6个月

免责声明

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司