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艾美捷Cy5.5单琥珀酰亚基酯 Cy5.5 NHS酯解决方案

点击次数:0发布时间:2022/9/19 17:12:13

艾美捷Cy5.5单琥珀酰亚基酯 Cy5.5 NHS酯解决方案

更新日期:2022/9/19 17:12:13

所 在 地:中国大陆

产品型号:

简单介绍:多种花青素5.5(Cy5.5)染料已用于标记生物分子,用于荧光成像和其他基于荧光的生化分析。

优质供应

详细内容

 Cy5.5单琥珀酰亚基酯 Cy5.5 NHS背景:

多种花青 5.5 (Cy5.5®) 染料已用于标记生物分子,用于荧光成像和其他基于荧光的生化分析。它们广泛用于标记肽、蛋白质和寡核苷酸等。Cy5.5® 染料是常见的红色荧光团之。Cy5.5® NHS 酯很容易与氨基反应。AAT Bioquest 提供三乙铵盐形式的 Cy 染料 NHS 酯,与其他些供应商提供的相应钾盐相比,它们更易溶于 DMSO 和 DMFCy 染料三乙基铵盐具有相同的反应性,并得到与 Cy 染料钾盐相同的缀合物。Cy5.5® 是 GE Healthcare 的商标。

1. 蛋白质原液(溶液 A

将 100 µL 反应缓冲液(例如,1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液,pH ~9.0)与 900 µL 目标蛋白溶液(例如抗体,如果可能,蛋白浓度 >2 mg/mL)混合,得到 1 mL 蛋白质标记原液。注意:蛋白质溶液(溶液 A)的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0,则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调节到 8.0-9.0 的范围内。笔记:蛋白质应溶解在 1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中,则必须对 1X PBSpH 7.2-7.4 进行透析,以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)。注意:不纯的抗体或用牛血清白蛋白 (BSA) 或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠丨氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰偶联反应。叠氮化钠或硫柳汞可以通过透析或离心柱去除以获得佳标记结果。笔记:如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL,偶联效率会显着降低。为获得佳标记效率,建议使用 2-10 mg/mL 的终蛋白质浓度范围。

 

2. 花青 5.5 单琥珀酰亚胺酯原液(溶液 B

将无水 DMSO 添加到花青 5.5 单琥珀酰亚胺酯的小瓶中,制成 10 mM 库存溶液。通过移液或涡旋充分混合。注意:在开始偶联之准备染料储备溶液(溶液 B)。及时使用。染料储备溶液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 在避光和防潮的情况下可在冰箱中保存两周。避免冻融循环。

 

艾美捷Cy5.5单琥珀酰亚基酯 Cy5.5 NHS示例实验协议:

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与花青 5.5 单琥珀酰亚胺酯的偶联物而开发的。您可能需要进步优化您的特定蛋白质。注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

 

艾美捷Cy5.5单琥珀酰亚基酯 Cy5.5 NHS运行偶联反应:

使用溶液 B(染料)/溶液 A(蛋白质)的 10:1 摩尔比作为起点:将 5 µL 染料储备溶液(溶液 B,假设染料储备溶液为 10 mM)添加到蛋白质小瓶中溶液(95 µL 溶液 A),有效摇动。假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD,则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。注意:我们建议使用溶液 B(染料)/溶液 A(蛋白质)的 10:1 摩尔比。如果太少或太高,分别确定J佳染料/蛋白质比例为 5:115:1 和 20:1

在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

 

以下方案是使用 Sephadex G-25 柱纯化染料-蛋白质偶联物的示例:

1.根据制造说明制备 Sephadex G-25 色谱柱。

2.将反应混合物(从“运行共轭反应”)加载到 Sephadex G-25 柱的顶部。

3.旦样品在顶部树脂表面下方运行,立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)

4.向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成色谱柱纯化。将含有所需染料-蛋白质结合物的部分结合起来。注意:为了立即使用,染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并分装以供多次使用。注意:为了长期储存,染料-蛋白质偶联物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

来源:https://www.amyjet.com/products/AAT-174.shtml

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