在这里，艾美捷Jackson详细介绍了如何建立多重标记实验，以及执行成功分析所需的一些注意事项。

图：小鼠GFAP（绿色）、NF（红色）、胶原蛋白IV（灰色）、波形蛋白（蓝色）z1。图片由加州大学圣巴巴拉分校神经科学研究所Gabe Luna提供。

Jackson丨艾美捷：设计多重标记实验

同时检测一种以上抗原的抗体选择取决于至少两个重要标准：

Jackson丨艾美捷：二抗体的可用性不识别

彼此（来自相同的寄主物种），

分析系统中使用的其他初抗体，

研究中的组织或细胞中存在内源性免疫球蛋白。

使用分辨率良好的探针（酶反应产物、荧光团或电子致密颗粒）。

多标签协议生成器

这个工具可以帮助你设计实验。它将应用上述标准来确定一抗体之间的潜在交叉反应性，从而确定每个二抗体所需的zui小交叉反应性。

输入样本的种类和您打算使用的抗体。优先对所有二抗体使用相同的宿主物种，以zui小化交叉反应的可能性。抗原名称可以通过直接在表中编辑文本来定制。

请注意，即使工具有所指示，也可能无法获得每个潜在的zui小交叉反应性排列。山羊和驴子通常是J佳的二抗体宿主物种选择，因为它们具有zui小的交叉反应性。

标记来自同一宿主物种的初抗体

亲和纯化二抗体的单价Fab片段可覆盖（阻断）免疫球蛋白的表面，用于同一宿主物种的双重标记一抗体，或阻断组织切片或细胞表面的内源性免疫球蛋白。它们可以用于这些目的，因为Fab片段只有一个抗原结合位点（即它们是单价的）。

标记与样本来自同一物种的初抗体

有时可能需要使用与样本来自同一物种的初抗体，例如鼠对鼠。在这些情况下，二抗体也可能检测到内源性免疫球蛋白，导致不必要的背景。这可以通过Fab片段阻断来避免。

进一步考虑

出于一般阻断目的，来自与二抗体宿主相同物种的正常血清（5%v/v）为非特异性、保守序列和/或Fc受体结合提供了有效的背景降低。

二抗体的单价Fab片段可以阻断抗体的特定不良反应。这种阻断适用于标本和初抗体属于同一物种的情况（例如，小鼠贴上标签），或在同一宿主动物中产生多个初抗体的情况。

可视化

成功的多重标记取决于探头的使用，探头的信号可以通过可用设备区分。

荧光显微镜是多重标记的通用平台，因为滤波器组被设计用于区分可用的多种荧光团。窄带通发射滤波器对于从多个荧光团中分离信号、抑制重叠光谱中的荧光检测至关重要。当计划多重标记协议时，用荧光团配制染料面板，其发射光谱分离良好，与可用仪器兼容。

Jackson ImmunoResearch注于亲和纯化的二抗和纯化免疫球蛋白研究，服务于大学科研所和医院里的动物研究以及生物医学研究机构的科学家。艾美捷科技是Jackson的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml