Jackson丨艾美捷直接-一步法：

在直接检测方法中（图1（A）），直接结合报告酶或荧光染料的一抗体用于在单个培养步骤后检测印迹膜上的蛋白质抗原。虽然这种一步法更快，但并没有广泛使用。图1（B）说明了直接结合一抗体的问题，报告分子可以阻断一抗体中的抗原结合区域，从而阻止对抗原的良好识别，并导致灵敏度降低。过量的一次可补偿这种影响，但可能导致再现性差和背景增加。

Jackson丨艾美捷间接-两步法：

Western印迹的两步间接检测方法避免了对抗原检测的干扰。未标记的一抗体与抗原结合在印迹膜上形成复合物。清洗后，用与报告酶或荧光团结合的二抗体培养印迹。多个二抗体与一抗体上的表位结合，形成标记的抗原抗体复合物（图1（C））。虽然间接法需要更多的洗涤和培养步骤，但与直接法相比，它具有许多优点，包括信号放大和灵活性。

图1：（A） 直接结合的一抗体结合结合在膜上的抗原。（B） 由于报告酶或荧光团可以结合到抗原结合区并降低抗体对其靶点的亲和力，所以直接结合的一抗体和结合在膜上的抗原结合较差。使用辅助设备可以消除这种情况。（C） 间接方法-多重共轭二抗体与未标记物一抗体结合。

直接和间接检测方法适用于Western blotting，但也可能与其他技术相关，如IHC/ICC、ELISA和流式细胞术。

Jackson直接和间接免疫印迹法文献参考：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain

Jackson ImmunoResearch注于亲和纯化的二抗和纯化免疫球蛋白研究，服务于大学科研所和医院里的动物研究以及生物医学研究机构的科学家。艾美捷科技是Jackson的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml