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高特异性-艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒方案
点击次数:0发布时间:2022/10/25 16:47:56
更新日期:2022/10/25 16:47:56
所 在 地:中国大陆
产品型号:
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详细内容
艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒提供了J为强大的分光光度法来测量焦磷酸盐。该试剂盒使用有的荧光焦磷酸酯传感器,其荧光强度与焦磷酸酯的浓度成比例关系。与磷酸盐和ATP相比,
本试剂盒中使用的PPi传感器对PPi具有相当高的选择性。与需要至少两种酶来检测焦磷酸的酶偶联法相比,该检测方法要简单得多,也更稳定。
艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒提供了测定焦磷酸的所有基本成分。本试剂盒已成功用于高通量筛选(HTS)。
艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒组分:
组份A:检测缓冲液 1瓶(25mL)
成分B: PPi传感器 1小瓶(冻干粉)。
组份C:焦磷酸盐标准品 1瓶(1mL,50mM)。
成分D: DMSO 1小瓶(100微升)
摘要:
准备好PPi传感器工作溶液(50微升)
加入焦磷酸盐标准品和/或检测样品(50 µL)。
在室温下孵育10至30分钟
在 Ex/Em = 370/470 nm(截止点 = 455 nm)处监测荧光强度。
重要说明
在开始实验在室温下解冻所有试剂盒成分。
储备液的制备:
除非另有说明,所有未使用的原液应分成一次性使用的等分,并在制备后储存在-20℃。避免反复冷冻-解冻循环。
1. PPi 传感器储备溶液(200X)。
将 50µL DMSO(成分 D)加入到 PPi 传感器(成分 B)的小瓶中,制成 200X 的 PPi 传感器储备溶液。注意:25 µL 的 PPi 传感器储备液足够用于一个 96 孔板。
制备 1 mM 焦磷酸盐标准液,将 10 µL 50 mM 焦磷酸盐标准液(成分 C)加入 490 µL 检测缓冲液(成分 A),或您选择的缓冲液(丨好是 50 mM Hepes 缓冲液,pH 7)中,制成 1 mM 焦磷酸盐标准液。取1mM焦磷酸盐标准品(PS7)进行1:3的连续稀释,得到用检测缓冲液(成分A)连续稀释的焦磷酸盐标准品(PS6-PS1)。
艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒工作溶液的制备:
将 25 µL 200X PPi 传感器储备液加入到 5 mL 检测缓冲液(成分 A)中,并充分混合。注意:由于该检测方法对 PPi 的高度敏感性,使用不含 PPi 的实验器具和试剂非常重要。注意:DTT(1uM)会增加背景,MgCl2≥2mM会降低反应。
图:焦磷酸盐、ATP和磷酸盐的剂量反应是用焦磷酸(PPi)分析试剂盒在纯黑色96孔板中用荧光微板阅读器测量的。
艾美捷焦磷酸(PPi)分析试剂盒部分引文:
1.Biological studies and target engagement of the 2-C-methyl-d-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase (IspD)-targeting antimalarial agent (1 R, 3 S)-MMV008138 and analogs
Authors: Ghavami, Maryam and Merino, Emilio F and Yao, Zhong-Ke and Elahi, Rubayet and Simpson, Morgan E and Fern{\'a}ndez-Murga, Maria L and Butler, Joshua H and Casasanta, Michael A and Krai, Priscilla M and Totrov, Maxim M and others,
Journal: ACS infectious diseases (2017): 549--559
2.Structural Insights into Inhibition of Escherichia coli Penicillin-binding Protein 1B
Authors: King, Dustin T and Wasney, Gregory A and Nosella, Michael and Fong, Anita and Strynadka, Natalie CJ
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): 979--993
3.Biological studies and target-engagement of the 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase (IspD)-targeting antimalarial agent (1R, 3S)-MMV008138 and analogs
Authors: Ghavami, Maryam and Merino, Emilio Fern and o , undefined and Yao, ZhongKe and Elahi, Rubayet and Simpson, Morgan and Fern, undefined and ez-Murga, Maria and Butler, Joshua Hayden and Casasanta, Michael and Krai, Priscilla and Totrov, Maxim and others, undefined
Journal: ACS Infectious Diseases (2017)