【肾癌组织源性原代细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【肾癌组织源性原代细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【肾癌组织源性原代细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【肾癌组织源性原代细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

336835    Custom Cignal Finder Reporter Array          CNY                                  

336111    Custom ELISArray        CNY                                  

940057    BioSprint 96 DNA Blood Kit (384)        CNY                                  

334471    EpiTect ChIP OneDay Kit (12)             CNY                                  

331260    miScript PreAMP Custom Primer Mix         CNY                                  

331001    RT² miRNA qPCR Assay (200)            CNY                                  

9010969  Plate stacker, detachable Unit for stacking up to ten 96-well plates; for use with the robotic handling system  CNY                            【肾癌组织源性原代细胞】      

9010928  Motor, X, SamTrack, P3xxx        CNY                                  

979302    PyroMark Q24 Cartridge (3) CE   For delivery of nucleotides ａnd reagents for use in PyroMark Q24. CE-Marked CNY                                  

981303    Rotor-Disc 72 (240)             CNY                                  

981005    PCR Tubes, 0.2 ml  (1000)          CNY                                  

9012976  Gripper, left, landoplasted, MTP 120            CNY                                  

931955    QIAsymphony Certal Vaccine NA Kit (96)           CNY                                  

929707    QX Cartridge Stand Cover (1)             CNY                                  

133252    NeXtalStock Sodium phosphate pH 7 (200)         CNY                                  

929606    QX FA Separation Buffer (40 ml)         CNY                                  

9010509  Motor, turntable 1/2 MTP, P3/7            CNY                                  

69525     mericon DNA Bacteria Kit (100)           CNY                                  

69106     DNeasy Plant Mini Kit (250)  250 DNeasy Mini Spin Columns, 250 QIAshredder Mini Spin Columns, RNase A, Buffers, Collection Tubes (2 ml)  CNY                                  

211015    QuantiTect Virus Kit (1000)          CNY                                  

206674    Type-it CNV SYBR Green PCR +qC Kit (400)            CNY                                  

9012763  Liquid Handling Kit Plato 1300             CNY                                  

59568     EpiTect Control DNA (1000)        CNY                            【肾癌组织源性原代细胞】      

979014    MOTT 16S Primers For PCR              CNY                                  

979011    PyroMark Q96 Vacuum Prep Trough (5)     Re-usable plastic troughs for use in all PyroMark Q96 Vacuum Workstations.       CNY                                  

59932     EpiTect MethyLight Assay Hs-ONECUT2(100)    "10-fold primer TaqMan probe mix, for real-time MethyLight PCR

For TaqMan probe-based real-time quantification of methylated or unmethylated CpG sites"    CNY                                  

59695     EpiTect PCR Control DNA Set (100)           CNY                                  

206343    Type-it Mutation Detect PCR Kit (200) "The Type-it Mutation Detect PCR Kit is especially developed for to fast ａnd reliable detection of mutations such as deletions, insertions,and translocations. It is also highly suited for multiplex PCR-based preamplification of SNPs as preparation for genotyping systems like the

SNaPshot Multiplex Kit from ABI

Features

 Successful & reproducible analysis of multiple mutations

 Optimization-free multiplex PCR assay development

 Specific ａnd sensitive coamplification of all fragments

 Optimized protocol for fast ａnd reliable results"      CNY                                  

206341    Type-it Mutation Detect PCR Kit (70)   "The Type-it Mutation Detect PCR Kit is especially developed for to fast ａnd reliable detection of mutations such as deletions, insertions,and translocations. It is also highly suited for multiplex PCR-based preamplification of SNPs as preparation for genotyping systems like the

SNaPshot Multiplex Kit from ABI

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 Specific ａnd sensitive coamplification of all fragments

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9012719  Set, Pins, (6 small, 4 large)           CNY                                  

929561    QX Size Marker 50 - 800 bp v2.0 (50 µl)            CNY                                  

972804    PyroMark Gold Q96 Reagents (5 x 96) "For performing pyrosequencing reaction on the ID (5x 96) ａnd Q96 MD (15x96)

ID needs more reagents"       CNY                                  

301705    HiPerFect Transfection Reagent (1 ml)        CNY                                  

QYC311  鸽腺病毒试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC401  犬细小抗体金标检测卡       20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC402  犬细小抗原金标检测卡       20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC403  犬瘟热抗原金标检测卡       20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC404  犬衣原体抗体金标检测卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC405  犬支原体抗体金标检测卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC406  犬冠状病毒检测试纸卡       20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC407  犬腺病毒II 型检测试纸卡  20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC408  犬副流感病毒检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC409  犬心丝虫抗原检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC410  犬狂犬病毒抗原检测试纸卡       20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC411  犬腺病毒1型检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC412  犬流感检测试纸卡       20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC413  猫瘟病毒检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                         【肾癌组织源性原代细胞】

QYC414  猫传染性腹膜炎病毒检测试纸卡       20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC415  猫白血病病毒检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC416  猫免疫缺陷病毒检测试纸卡       20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC417  利什曼虫检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC418  鹦鹉热衣原体检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC419  布氏杆菌抗体检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC420  布氏杆菌抗原检测试纸卡    20T/盒    抗血清检测诊断                        

QYC501  蔬菜农药速测卡    20T/盒    蔬菜农药残留检测                           

QYC502  茶叶农药速测卡    20T/盒    茶叶农药残留检测                           

QYC503  "粮食农药速测卡

"      20T/盒    粮食农药残留检测                           

QYC504  蔬菜农药检测卡    20T/盒    蔬菜农药残留检测                           

QYC505  高灵敏度农药速测卡    20T/盒    蔬菜农药残留检测                           

QY101    盐酸克伦特罗检测试剂盒    96孔/盒 各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                        

QY102    莱克多巴胺检测试剂盒       96孔/盒 各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                        

QY103    沙丁胺醇检测试剂盒    96孔/盒 各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                        

QY104    β-兴奋剂检测试剂盒  96孔/盒 各种动物组织/水产/蜂蜜                          【肾癌组织源性原代细胞】

QY105    呋喃唑酮代谢物检测试剂盒       96孔/盒 各种动物组织/水产/蜂蜜