【前列腺癌组织源性原代细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【前列腺癌组织源性原代细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【前列腺癌组织源性原代细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【前列腺癌组织源性原代细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9012397  Holder, vacuum trap, auto vac, BR8000              CNY                                  

204854    QuantiFast Multiplex RT-PCR Kit (400)              CNY                                  

133174    NeXtalStock CHES pH 10.0 (200)        CNY                                  

133173    NeXtalStock CHES pH 9.0 (200)         CNY                                  

291043    mericon Screen nos Kit (24)         CNY                                  

290135    mericon Vibrio triple Kit (96)        CNY                                  

290115    mericon Y. enterocolitica Kit (96)         CNY                                  

9015402  O-rings, plunger, M96 (8)            CNY                                  

9001731  QIAgility HEPA / UV Instrument          CNY                                  

133088    NeXtalStock PEG 550 MME (200)              CNY                                  

38025     MAL Cartridge (5ml)            CNY                                  

292015    mericon Pig Kit (96)             CNY                                  

133123    NeXtalStock Tris (200)         CNY                                  

965672    QIAamp One-For-All Nucleic Acid Kit (12)         CNY                                  

133192    NeXtalStock Ammonium tartrate pH 7 (200)              CNY                            【前列腺癌组织源性原代细胞】      

133183    NeXtalStock Citric acid pH 3.5 (200)          CNY                                  

9018513  Adapter, USB-serial, EZ1a            CNY                                  

9001896  QIAxtractor, UV/HEPA (w/o PC) System     QIAxtractor, UV/HEPA (w/o PC) System combines the QIAxtractor system ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It provides the user with a training on operation ａnd user maintenance. All travel ａnd labor cost included for Installation. The performance of the installation process is documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.  CNY                                  

51104      QIAamp DNA Blood Mini Kit (50) For 50 DNA minipreps: 50 QIAamp Mini Spin Columns, QIAGEN Protease, Reagents, Buffers, Collection Tubes (2 ml)   CNY                                  

133099    NeXtalStock Potassium nitrate (200)           CNY                                  

133092    NeXtalStock PEG 8,000 (200)             CNY                                  

9015516  Heat unit, complete        CNY                                  

9018452  Piston, purge (1), QX           CNY                                  

9012416  Microplate Station 8000, short      Station for accommodating a 96-well plate (or other labware with the same base dimensions) on the BioRobot 8000 or MDx worktable CNY                                  

133168    NeXtalStock CAPSO pH 9.2 (200)              CNY                                  

9018424  Door, N2, QX        CNY                                  

9015405  Board, PDB, M96          CNY                                  

9015386  Manual, Service, BIOROBOT MDx             CNY                                  

9001863  Rotor-Gene Q 2plex HRM (PC) Priority       Rotor-Gene Q 2plex HRM (PC) Priority includes the Rotor-Gene Q system, installation ａnd extended warranty. Installation covers hardware ａnd software installation of system ａnd provides user with on site introductory training. Priority package extends warranty period of the system to 2 years with shipment to Repair Center Service has response turnaround time (repair) 7-10 days. One preventive maintenance visit is included for each year of the warranty; 2 preventive maintenance visits in total. Replacement system (Loaner) provision included (provision time 2-3 days) with transportation cost coverage. The service package includes all parts, labor ａnd travel costs with installation performance ａnd service visits documented on a GMP/GLP-compliant Field Service documents. CNY                                  

9001720  Rotor-Gene Q 6Plex no PC           CNY                                  

9012331  Set, Tubing, Pipetting, Plato3xx1         CNY                            【前列腺癌组织源性原代细胞】      

133084    NeXtalStock PEG 300 (200)         CNY                                  

38065     #PNA Cartridge (5ml)           CNY                                  

QYD523  猪细小病毒抗体检测试剂盒       96孔/盒                             

QYD524  猪圆环病毒抗体检测试剂盒       96孔/盒                             

QYD525  猪弓形体病毒抗体检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD526  猪流行性腹泻病毒抗体检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD527  猪传染性胃肠炎病毒抗体检测试剂盒       96孔/盒                             

QYD528  鸡禽流感病毒抗体检测试剂盒    96孔/盒                              【前列腺癌组织源性原代细胞】

QYD529  鸭禽流感病毒抗体检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD530  鸡新城疫抗体检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD531  鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD532  小反刍兽疫抗体检测试剂盒（*新产品）       96孔/盒                             

QYD533  羊口蹄疫抗体检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD534  猪瘟抗体金标快速检测卡  CSFV Antibody Rapid test kit 50T/盒                               

QYD535  猪口蹄疫抗体金标快速检测卡 FMDV Antibody Rapid test kit 50T/盒                               

QYD536  猪伪狂犬病抗体金标快速检测卡 PRV Antibody Rapid test kit 50T/盒                               

QYD537  猪蓝耳病抗体金标检快速测卡 PRRSV Antibody Rapid test kit       50T/盒                               

QYD538  猪园环病毒病抗体金标快速检测卡 PCV-2 Antibody Rapid test kit  50T/盒                               

QYD539  猪瘟病毒抗原金标检快速测卡 CSFV Antigen Rapid test kit    50T/盒                               

QYD540  犬瘟热抗原金标检测快速卡 CDV Antigen Rapid test kit  50T/盒                               

QYD541  犬细小病毒抗原金标快速检测卡 CPV Antigen Rapid test kit   50T/盒                               

QYD542  禽流感病毒抗原金标快速检测卡AIV Antigen Rapid test kit     50T/盒                               

QYD543  盐酸克伦特罗（瘦肉精）金标快速检测卡Clenbuterol Rapid test kit      20T/盒                               

QYD544  莱克多巴胺金标快速检测卡Ractopaminel Rapid test kit   20T/盒                                【前列腺癌组织源性原代细胞】

QYD545  三聚氰胺金标快速检测卡Melamine Rapid test kit     20T/盒                               

QYD546  志贺氏毒素检测试剂盒       96孔/盒                             

QYD547  金葡肠毒素检测试剂盒（分型）       96孔/盒                             

QYD548  金葡肠毒素检测试剂盒       96孔/盒                             

QYD549  沙门氏菌检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD550  李斯特菌检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD551  空肠弯曲菌检测试剂盒       96孔/盒                             

QYD552  沙门氏菌检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD553  李斯特菌检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD120  猪传染性肠胃炎病毒检测试剂盒       96孔/盒 用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中传染性胃肠炎病毒(TGEV)表达                           

QYD121  猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测试剂盒        96孔/盒 用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中流行性腹泻病毒（PEDV）表达                         

QYD122  猪轮状病毒抗原（RV-Ag)检测试剂盒       96孔/盒 用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中轮状病毒抗原（RV-Ag)表达                           

QYD123  猪圆环病毒抗原（PCV）检测试剂盒 96孔/盒 用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中圆环病毒（PCV）表达                     

QYD124  猪链球菌（strep）检测试剂盒    96孔/盒 用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中链球菌（strep）表达                        

QYD125  猪嗜血杆菌(HPS)检测试剂盒     96孔/盒 用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中嗜血杆菌(HPS)表达                         

QYD126  鸡禽流感H5N1抗体检测试剂盒 96孔/盒                             

QYD201  鸡禽流感H9抗体检测试剂盒     96孔/盒                             

QYD201  鸡传染性喉气管炎抗体检测试剂盒    96孔/盒