【卵巢癌组织源性原代细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【卵巢癌组织源性原代细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【卵巢癌组织源性原代细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【卵巢癌组织源性原代细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9015354  Springs, gas (2)            CNY                                  

133054    NeXtalStock Imidazole HCl (200)         CNY                                  

9001671  PyroMark Q24 Instrument    For methylation ａnd mutation analysis using Pyrosequencing technology in 24 well  CNY                                  

950901    Capture Plate, standard yield (5)           CNY                                  

37430     PhosphoSerine Antibody Q5  100 ug mixture of anti-phosphoserine antibodies(isotypes mouse IgG1 ａnd IgM, for 200 ml working solution)   CNY                                  

133030    NeXtalStock Cesium sulfate (200)        CNY                                  

9001627  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) System  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) System Priority includes the Rotor-Gene system ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It covers the handling of the Rotorgene-Q systems hardware ａnd trains the user on operation of the Rotorgene software. All travel ａnd labor cost included for Installation ａnd service documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.     CNY                                  

9001620  Rotor-Gene Q 2plex System         CNY                                  

9001603  Rotor-Disc 100 Starter Kit (230V)        CNY                                  

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133161    NeXtalStock CAPS pH 10.6 (200)        CNY                                  

133070    NeXtalStock BICINE (200)          CNY                                  

922911    LiquiChip Calibration Bead Kit       Classification Calibration Beads (CAL1, 5ml); Reporter Calibration Beads (CAL2, 5ml)       CNY                                  

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For quantitative, real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using probe detection with multiple assays." CNY                                  

204352    QuantiFast Probe PCR+ROX Vial Kit (80)           CNY                                  

9015361  Slide table              CNY                                  

133050    NeXtalStock HEPES sod. salt pH 7.5 (200)         CNY                                  

9018391  Key, Data Review, green, QIAxcel        CNY                                  

9018387  Lamp, UV, EZ1a            CNY                                  

951356    MagAttract DNA Blood Midi M48 Kit (192)  MagAttract Suspension B, buffers, ａnd RNase-free water for up to 192 x 350 ul preps   CNY                                  

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133034    NeXtalStock Ammonium citrate (200)         CNY                            【卵巢癌组织源性原代细胞】   

9001628  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) Priority  Rotor-Gene Q 2plex (w/o PC) Priority includes the Rotor-Gene Q system, installation ａnd extended warranty. Installation covers hardware ａnd software installation of system ａnd provides user with on site introductory training. Priority package extends warranty period of the system to 2 years with shipment to Repair Center Service has response turnaround time (repair) 7-10 days. One preventive maintenance visit is included for each year of the warranty; 2 preventive maintenance visits in total. Replacement system (Loaner) provision included (provision time 2-3 days) with transportation cost coverage. The service package includes all parts, labor ａnd travel costs with installation performance ａnd service visits documented on a GMP/GLP-compliant Field Service documents. CNY                                  

239035    GelPilot 100 bp Ladder (100) Ready-to-use DNA marker, 600µl (100lanes), 6 fragments: 100- 600 bp    CNY                                  

9015304  Sensor, reagent tub stopper, M48         CNY                                  

133144    NeXtalStock 8 M Ammonium acetate (200)         CNY                                  

QYD585  禽流感ELISA试剂盒（AI-Ab)    96孔/盒                             

QYD586  禽脑脊髓炎ELISA试剂盒（AE-Ab)   96孔/盒                             

QYD587  传染性喉气管炎ELISA试剂盒（ILT-Ab)  96孔/盒                             

QYD588  鸭肠炎沙门氏菌ELISA试剂盒（SE-Ab)   96孔/盒                             

QYD589  鸭鼠伤寒沙门氏菌ELISA试剂盒 （ST-Ab）   96孔/盒                             

QYD590  鸡传染性贫血ELISA试剂盒（CAV-Ab)     96孔/盒                             

QYD591  伪狂犬 -抗体检测ELISA    96孔/盒                             

QYD592  猪瘟 - 抗体检测ELISA      96孔/盒                              【卵巢癌组织源性原代细胞】

QYD593  猪瘟 - 抗原检测 ELISA     96孔/盒                             

QYD594  口蹄疫-NS(3ABC) - 抗体检测ELISA 96孔/盒                             

QYD595  口蹄疫-NS(3ABC)- 抗体检测ELISA  96孔/盒                             

QYD596  口蹄疫 - 抗体检测ELISA   96孔/盒                             

QYD597  蓝耳病 - 抗体检测ELISA   96孔/盒                             

QYD598  圆环病毒 IgG - 抗体检测ELISA       96孔/盒                             

QYD599  猪水泡病毒 - 抗体检测ELISA   96孔/盒                             

QYD600  猪细小病毒 - 抗体检测ELISA: Ceditest PPV   96孔/盒                             

QYD601  猪传染性胸膜肺炎 - 抗体检测ELISA：Ceditest APP     96孔/盒                             

QYD602  猪瘟 - 抗体检测ELISA      96孔/盒                             

QYD603  猪传染性胸膜肺炎 - 抗体检测ELISA      96孔/盒                             

QYD604  猪丹毒 - 抗体检测ELISA   96孔/盒                             

QYD605  猪丹毒 - 抗原检测ELISA   96孔/盒                             

QYD606  猪传染性胃肠炎 - 抗体检测ELISA   96孔/盒                             

QYD607  猪沙门氏菌 - 抗体检测ELISA   96孔/盒                             

QYD608  猪流感- 抗体检测ELISA    96孔/盒                              【卵巢癌组织源性原代细胞】

QYD609  猪流感- 抗原检测ELISA    96孔/盒                             

QYD610  猪副嗜血杆菌- 抗体检测ELISA 96孔/盒                             

QYD611  猪轮状病毒- 抗体检测ELISA    96孔/盒                             

QYD612  猪轮状病毒- 抗原检测ELISA    96孔/盒                             

QYD613  反刍动物弓形虫抗体检测ELISA       96孔/盒                             

QYD614  非洲猪瘟抗体检测试剂盒    96孔/盒                             

QYD615  鲤鱼卵黄蛋白原试剂盒       96孔/盒                             

QYD125  猪嗜血杆菌(HPS)检测试剂盒     96孔/盒 用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中嗜血杆菌(HPS)表达                         

QYD126  鸡禽流感H5N1抗体检测试剂盒 96孔/盒                             

QYD201  鸡禽流感H9抗体检测试剂盒     96孔/盒                             

QYD201  鸡传染性喉气管炎抗体检测试剂盒    96孔/盒