【宫颈癌组织源性原代细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【宫颈癌组织源性原代细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【宫颈癌组织源性原代细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【宫颈癌组织源性原代细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9018950  Flip-Cap Tube Lifter 32x1.5ml Tapered        CNY                                  

9019168  Set, O-Ring (32), Qsym        CNY                                  

9014168  RCS - Shipping Crate            CNY                                  

9021250  Tube Spinner Assembly, DCU              CNY                                  

9021189  Adapter, skirted PCR plate, BS96         CNY                                  

9021023  Lid, waste box, SP, Qsym            CNY                                  

9021014  Controller, Gripper, VR, DCU              CNY                                  

9021010  Controller, X Axis, VR, DCU        CNY                                  

9020904  Lid, SMC, QXT            CNY                                  

9020901  Multi.Carrier (2) for 7 cult.tubes 50ml         CNY                                  

9020709  Cable, y, z, & p motor harness, C34            CNY                            【宫颈癌组织源性原代细胞】   

9020645  Waste chute, bent, AS, Cabinet Qsym          CNY                                  

9020558  Tubing, complete vacuum assembly, CX1           CNY                                  

9020485  Stepper drive assembly, GSC        CNY                                  

9020320  PM kit, C12 & QIAgility (HEPA), CG1        CNY                                  

9017624  Drive tooth wheel, y-drive, BR8RD V2.1            CNY                                  

9017601  Wash Pump, BR8 RD           CNY                                  

9020260  Front door, Qsym          CNY                                  

9020259  Side Pannel, top right, Qsym        CNY                                  

9017267  SOW QIAsoft  MDx Dispens. RNase-free.PRO        CNY                                  

9017258  BR 8000, Plasmid Purification Package        CNY                                  

9020223  PCB, USB, QXT           CNY                                  

9020220  Cover, Pipettor, 1 ch. (silver), QGY             CNY                                  

972022    PyroMark Q96 CpG MLH1 (96)   For quantification of methylation level in MLH1 promoter   CNY                                  

133226    NeXtalStock Sodium cacodyl. pH 5.0 (100)        CNY                                  

301307    SuperFect Transfection Reagent(4x1.2 ml)  For 160 transfections in 60 mm dishes or 640 transfections in 12-well plates       CNY                                  

56404     QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (50)            CNY                            【宫颈癌组织源性原代细胞】   

133210    NeXtalStock MES pH 7.0 (100)           CNY                                  

133200    NeXtalStock Imidazole pH 6.0 (200)           CNY                                  

293033    mericon Apricot kernels (24)        CNY                                  

292075    mericon Ruminant Kit (96)           CNY                                  

9012656  Cable, pressure sensor, BR8000           CNY                                  

9012599  Disposable Filter-Tips, 300µl (960)      Conducting disposable filter-tips    CNY                                  

QYD647  单增李斯特氏菌荧光定量PCR检测试剂盒      48次/盒                             

QYD648  大肠埃希菌O157:H7荧光定量PCR检测试剂盒      48次/盒                             

QYD649  金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测试剂盒      48次/盒                             

QYD650  志贺氏菌属荧光定量    48次/盒                             

QYD651  空肠弯曲菌荧光定量PCR检测试剂盒      48次/盒                             

QYD652  小肠结肠炎耶尔森菌荧光定量PCR检测试剂盒      48次/盒                             

QYD653  溶血性链球菌荧光定量PCR检测试剂盒 48次/盒                             

QYD654  霍乱弧菌荧光定量PCR检测试剂盒   48次/盒                             

QYD655  副溶血弧菌荧光定量PCR检测试剂盒      48次/盒                             

QYD656  产毒副溶血弧菌荧光定量PCR检测试剂盒      48次/盒                              【宫颈癌组织源性原代细胞】

QYD657  创伤弧菌荧光定量PCR检测试剂盒   48次/盒                             

QYD658  口蹄疫O型病毒抗体间接血凝检测试剂盒                                         

QYD659  猪瘟正向间接血凝试验试剂盒    100头份/盒    800                      

QYD660  口蹄疫O型病毒抗体间接血凝检测试剂盒       100头份/盒    600                      

QYD661  盐酸克伦特罗检测试纸条    20份/盒  5元/份    15元/份               

QYD662  盐酸克伦特罗检测试纸条    20份/盒  9元/份    20元/份               

QYD663  莱克多巴胺检测试纸条（尿样）       20份/盒  5元/份    15元/份               

QYD664  莱克多巴胺检测试纸条(组织)     20份/盒  9元/份    20元/份               

QYD665  氯霉素检测试纸条（液态样品）       20份/盒  5元/份    15元/份               

QYD666  氯霉素检测试纸条（组织）       20份/盒  11元/份  25元/份               

QYD667  孔雀石绿检测试纸条（水样）    20份/盒  11元/份  25元/份               

QYD668  孔雀石绿检测试纸条（组织）    20份/盒  22元/份  50元/份               

QYD669  三聚氰胺快速检测试纸卡    10份/盒  15元/份  35元/份               

QYD670  小反刍兽疫检测试纸条       20份/盒  11元/份  25元/份               

QYD671  盐酸克伦特罗和莱克多巴胺       20份/盒  13.5元/份      30元/份               

QYD672  二联快速检测试纸条    20份/盒  13.5元/份  30元/份                         【宫颈癌组织源性原代细胞】

QYD673  牛结核病抗体检测试剂盒    Elisa 2*96孔                       

QYD674  荷兰赛迪口蹄疫0型2板试剂盒 Elisa 2*96孔                       

QYD675  口蹄疫非结构蛋白抗体检测试剂盒    Elisa 5*96孔                       

QYD676  猪瘟抗原2板检测试剂盒    Elisa 2*96孔                       

QYD677  伪狂犬病毒gE2.0抗体诊断试剂盒    Elisa 5*96孔                       

QYD201  鸡传染性喉气管炎抗体检测试剂盒    96孔/盒