【胶质瘤组织源性原代细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【胶质瘤组织源性原代细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【胶质瘤组织源性原代细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

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【胶质瘤组织源性原代细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9019022  Worktable cover, EZ1xl         CNY                            【胶质瘤组织源性原代细胞】   

9018999  Cover, front, bottom, EZ1xl          CNY                                  

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9015526  Board, motor driver              CNY                                  

QYD709  孔雀石绿ELISA定量检测试剂盒       用于检测饲料、水产品等，适用于大型水产公司，农产品检测中心等                                  

QYD710  金霉素ELISA定量检测试剂盒   用于检测饲料、蜂蜜、牛奶、水产品、各种动物肉组织，包括鸡鸭鹅等，适用于屠宰场，动物防疫站/监督所，农产品检测中心，大型肉食品加工企业等                              

QYD711  泰乐菌素、替米考星ELISA定量检测试剂盒   动物（猪鸡）组织（肌肉、肝脏）                               

QYD712  沙门、志贺氏菌核酸检测试剂盒       食品安全PCR检测                                 

QYD713  四环素类药物（四合一）ELISA定量检测试剂盒    动物组织、饲料、尿液、鸡蛋、牛奶、蜂蜜                               

QYD714  莱克多巴胺（RAC）快速检测卡       用于检测饲料、蜂蜜、牛奶、水产品、各种动物肉组织，包括鸡鸭鹅等，适用于屠宰场，动物防疫站/监督所，农产品检测中心，大型肉食品加工企业等                              

QYD715  克伦特罗（CL）快速检测卡      用于检测饲料、蜂蜜、牛奶、水产品、各种动物肉组织，包括鸡鸭鹅等，适用于屠宰场，动物防疫站/监督所，农产品检测中心，大型肉食品加工企业等                              

QYD716  沙丁胺醇快速检测卡    用于检测饲料、蜂蜜、牛奶、水产品、各种动物肉组织，包括鸡鸭鹅等，适用于屠宰场，动物防疫站/监督所，农产品检测中心，大型肉食品加工企业等                              

QYD717  氯霉素（CAP）快速检测卡 用于检测饲料、蜂蜜、牛奶、水产品、各种动物肉组织，包括鸡鸭鹅等，适用于屠宰场，动物防疫站/监督所，农产品检测中心，大型肉食品加工企业等                              

QYD718  喹诺酮类（QNS）快速检测卡    用于检测饲料、蜂蜜、牛奶、水产品、各种动物肉组织，包括鸡鸭鹅等，适用于屠宰场，动物防疫站/监督所，农产品检测中心，大型肉食品加工企业等                              

QYD719  农药残留快速检测卡    用于检蔬菜、水果等，适用于大型农贸市场、农业局、农产品检测中心等                                  

QYD720  青霉素残留快速检测卡       牛奶、蜂蜜等                                   【胶质瘤组织源性原代细胞】

QYD721  四环素残留快速检测卡       牛奶、蜂蜜等                                  

QYD722  链霉素残留快速检测卡       牛奶、蜂蜜等                                  

QYD723  庆大霉素残留快速检测卡    牛奶、蜂蜜等                                  

QYD724  新霉素快速检测卡       牛奶、蜂蜜等                                  

QYD725  红霉素快速检测卡       牛奶、蜂蜜等                                  

QYD726  泰乐菌素快速检测卡    牛奶、蜂蜜等                                  

QYD727  头孢菌素快速检测卡    牛奶、蜂蜜等                                  

QYD728  孔雀石绿快速检测卡    用于检测饲料、水产品等，适用于大型水产公司，农产品检测中心等                                  

QYD729  β-内酰胺类快速检测卡      牛奶、蜂蜜等                                  

QYD730  黄曲霉B1检测卡 饲料、豆类、麦类、谷类；酱油                                  

QP1011   猪瘟抗体金标快速检测卡  CSFV Antibody Rapid test kit 全血、血清    50T/盒                        

QP1012   猪口蹄疫抗体金标快速检测卡 FMDV Antibody Rapid test kit 全血、血清    50T/盒                        

QP1013   猪伪狂犬病抗体金标快速检测卡 PRV Antibody Rapid test kit 全血、血清    50T/盒                        

QP1014   猪蓝耳病抗体金标检快速测卡 PRRSV Antibody Rapid test kit       全血、血清    50T/盒                        

QP1015   猪园环病毒病抗体金标快速检测卡 PCV-2 Antibody Rapid test kit  全血、血清    50T/盒                        

QP1016   猪瘟病毒抗原金标检快速测卡 CSFV Antigen Rapid test kit    全血、血清    50T/盒                         【胶质瘤组织源性原代细胞】

QP1017   犬瘟热抗原金标检测快速卡 CDV Antigen Rapid test kit  分泌物、血清       50T/盒                        

QP1018   犬细小病毒抗原金标快速检测卡 CPV Antigen Rapid test kit   粪便       50T/盒                        

QP1019   禽流感病毒抗原金标快速检测卡AIV Antigen Rapid test kit     眼、气管、肛门分泌物       50T/盒                        

QYD707  呋喃妥因残留标示物ELISA定量检测试剂盒 用于检测饲料、水产品等，适用于大型水产公司，农产品检测中心等                 

QYD708  呋喃它酮残留标示物ELISA定量检测试剂盒 用于检测饲料、水产品等，适用于大型水产公司，农产品检测中心等                 

QYD672  二联快速检测试纸条    20份/盒  13.5元/份  30元/份                         【宫颈癌组织源性原代细胞】

QYD673  牛结核病抗体检测试剂盒    Elisa 2*96孔                       

QYD674  荷兰赛迪口蹄疫0型2板试剂盒 Elisa 2*96孔                       

QYD675  口蹄疫非结构蛋白抗体检测试剂盒    Elisa 5*96孔                       

QYD676  猪瘟抗原2板检测试剂盒    Elisa 2*96孔                       

QYD677  伪狂犬病毒gE2.0抗体诊断试剂盒    Elisa 5*96孔                       

QYD201  鸡传染性喉气管炎抗体检测试剂盒    96孔/盒