【冠状动脉内皮细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【冠状动脉内皮细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【冠状动脉内皮细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【冠状动脉内皮细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

950172    Elution Reagent (DXE) (125 ml)          CNY                                  

950037    QIAxtractor DNA Plasticware       The Reagent Pack, DX,(#950107) which is used together with the DNA Plasticware Pack, QIAxtractor provides fully automated DNA purification on the QIAxtractor. The combination of reagents ａnd plasticware enables purification of genomic DNA from virtually all types of sample, with a throughput of 8-96 samples per run.     CNY                                  

218431    Human miScript Assay 384 Set VXX.X (20)              CNY                                  

9018286  Y-Belt, BR8RD              CNY                                  

800421    Library, Large Insert, Setupt         CNY                                  

800351    Direct Genomic DNA Sequencing, w/o prep        CNY                                  

1030483  Elution Microtubes CL, PAX, FLU              CNY                                  

133004    NeXtalStock MES pH 6.5 (200)           CNY                                  

9243774  QIAsymphony AS Custom Protocol Advanced1          CNY                            【冠状动脉内皮细胞】      

9018175  Optical sensor, Qsym            CNY                                  

9018159  Touch screen, Qsym            CNY                                  

9018131  Drop catcher, extractor, Qsym             CNY                                  

9017831  Switch, power, incl. cabling, QIAC             CNY                                  

9017827  Optosensor, loadcheck, QIAC              CNY                                  

9017814  Flexcircuit, gripper, 14 pol. , QIAC             CNY                                  

9017787  Motor, X-drive, complete, QIAC          CNY                                  

9015275  Accessory Cabinet  BR8000RD          CNY                                  

9015071  EX.UNIT, Syringe Pump Plato 3000 (9194)        CNY                                  

9015184  Reagent Holders, large, M96 (5)           CNY                                  

9015158  Upgrade, QIAsoft 4, PLUS    "This includes the latest version of the QIAsoft 4 Operating System software plus

       a COMPAQ 2 GHz PC with flat screen monitor ａnd the optimization ａnd

       installation of 3 existing protocols.  Also included is the labor ａnd travel cost for

       the on-site installation ａnd training."      CNY                                  

9016753  Shaker Adapter,  24-tube,  PAXgene, 13ml              CNY                                  

9019904  PCB - Distribution, PyroQ24        CNY                                  

9018150  PCB, interface, drawer, Qsym             CNY                                  

9018129  Belt, x, extractor, Qsym        CNY                                  

9018082  LiquiChip MDD Computer            CNY                            【冠状动脉内皮细胞】      

9017871  Head, gripper, QIAC             CNY                                  

9017849  Swing-out Buckets (2)          CNY                                  

9017839  Shaker Key            CNY                                  

9017829  Board, centrifuge (110V), QIAC           CNY                                  

9017811  Cable, flat, centrifuge, QIAC        CNY                                  

9017792  Motor, Z-drive, pipettor, complete, QIAC            CNY                                  

9015215  EX.UNIT, Dilutor, BR8000           CNY                                  

9015181  Waste Chute, M48         CNY                                  

β-突触核蛋白      Beta-Synuclein       0.5mg                                

β-突触核蛋白      Beta-Synuclein       1.0mg                                

15N,α-突触核蛋白      15N, Alpha-Synuclein, Uniform Label   0.5mg                                

15N,α-突触核蛋白      15N, Alpha-Synuclein, Uniform Label   1.0mg                                

γ-突触核蛋白      Gamma-Synuclein  0.5mg                                

γ-突触核蛋白      Gamma-Synuclein  1.0mg                                

α-突触核蛋白, δ NAC     Alpha-Synuclein, Delta NAC  0.5mg                                

α-突触核蛋白, 112 (NACP 112)  Alpha-Synuclein, 112 (NACP 112) 0.5mg                                

QPH00121      Recombinant Human beta-NGF     Peprotech       5ug/20ug/                           

QPH00122      Recombinant Murine β-NGF  Peprotech       5ug/20ug/                           

QPH00123      Recombinant Human BMP-2  Peprotech       2ug/10ug/                           

QPH00124      Recombinant Murine EGF     Peprotech       100ug/500ug/                       【冠状动脉内皮细胞】

QPH00125      Recombinant Human EGF     Peprotech       100ug/500ug/                      

QPH00126      Recombinant Human FGF-acidic   Peprotech       50ug/1mg                           

QPH00127      Recombinant Human FGF-acidic   Peprotech       10ug/50ug/                         

QPH00128      Recombinant Murine FGF-acidic   Peprotech       10ug/50ug/                         

QPH00129      Recombinant Human FGF-basic    Peprotech       50ug/1mg                           

QPH00130      Recombinant Human FGF-basic    Peprotech       10ug/50ug/                         

QPH00131      Recombinant Murine FGF-basic    Peprotech       10ug/50ug/                         

QPH00132      Recombinant Murine G-CSF  Peprotech       2ug/10ug/                           

QPH00133      Recombinant Human G-CSF  Peprotech       2ug/10ug/                           

QPH00134      Recombinant Human GM-CSF      Peprotech       10ug/1mg/                          

QPH00135      Recombinant Human GM-CSF      Peprotech       2ug/10ug/                           

QPH00136      Recombinant Murine GM-CSF      Peprotech       10ug/1mg/                          

QPH00137      Recombinant Murine GM-CSF      Peprotech       2ug/10ug/                           

QPH00138      Recombinant Human HGF     Peprotech       2ug/10ug/                           

QPH00139      Recombinant Human IFN-r   Peprotech       20ug/100ug/                       

QPH00140      Recombinant Murine IFN-r   Peprotech       20ug/100ug/                        【冠状动脉内皮细胞】

QPH00141      Recombinant Human IGF-1   Peprotech       100ug/1mg                         

QPH00142      Recombinant Human IGF-1   Peprotech       20ug/100ug/                       

QPH00143      Recombinant Murine IGF-1   Peprotech       10ug/50ug/                         

α-突触核蛋白   Alpha-Synuclein 1.0mg                  

α-突触核蛋白, 1-60 Alpha-Synuclein, 1-60   0.5mg                  

α-突触核蛋白, 1-95 Alpha-Synuclein, 1-95   0.5mg                  

α-突触核蛋白, 61-140   Alpha-Synuclein, 61-140 0.5mg                  

α-突触核蛋白, 96-140   Alpha-Synuclein, 96-140 0.5mg                  

α-突触核蛋白, A53T突变体   Alpha-Synuclein, A53T mutant    0.5mg                  

α-突触核蛋白, A53T突变体   Alpha-Synuclein, A53T mutant    1.0mg                  

α-突触核蛋白, A30P突变体   Alpha-Synuclein, A30P mutant    0.5mg                  

α-突触核蛋白, A30P突变体   Alpha-Synuclein, A30P mutant    1.0mg                   【脐动脉平滑肌细胞】

α-突触核蛋白 A30P, A53T突变体  Alpha-Synuclein, A30P, A53T mutant  0.5mg                  

α-突触核蛋白 A30P, A53T突变体  Alpha-Synuclein, A30P, A53T mutant  1.0mg                  

α-突触核蛋白, E46K突变体   Alpha-Synuclein, E46K mutant    0.5mg                  

α-突触核蛋白, E46K突变体   Alpha-Synuclein, E46K mutant    1.0mg                  

QYH20    生长激素（hGH）检测试剂盒（血清）    Growth Hormone (hGH)       96孔/盒                      

QYH21    胰岛素样生长因子结合蛋白1（IGFBP-1）检测试剂盒（血清）  Insulin-Like Growth Factor Binding Protein-1 (IGFBP-1)      96孔/盒                      

QYH22    促黄体生成素（hLH）检测试剂盒（血清）     Luteinizing Hormone (hLH)   96孔/盒                      

QYH23    瘦素检测试剂盒（血清）    Leptin     96孔/盒                       【脐静脉平滑肌细胞】

QYH24    卵巢癌（CA125）检测试剂盒（血清）    Ovarian Cancer (CA125)       96孔/盒                      

QYH25    孕烯醇酮检测试剂盒（血清）    Pregnenolone  96孔/盒                      

QYH26    孕酮检测试剂盒（血清）    Progesterone   96孔/盒                      

QYH27    孕酮（唾液）检测试剂盒    Progesterone Saliva       96孔/盒                      

QYH28    催乳素检测试剂盒（血清）       Prolactin  96孔/盒