【直肠粘膜上皮细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【直肠粘膜上皮细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【直肠粘膜上皮细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【直肠粘膜上皮细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9240526  Cable, Motor Axis #3, Capper I/O, AP98             CNY                            【直肠粘膜上皮细胞】      

9240500  Fluidic Valve, Reagent Pump, AP          CNY                                  

9240240  Collet nut, TR        CNY                                  

9240099  #Re-Installation, BR M48      The Re-Installation, BR M48 facilitates quick implementation of system back into lab routine by minimizing  instrument set-up phase. It covers hardware ａnd software check of instrument ａnd provides user with operator refesher overview.  Re-installation includes labor ａnd travel costs. Re-installation performance process is documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.     CNY                                  

9239855  Compressor, v2.0          CNY                                  

9019494  Measurement Gauge Kit, RCS              CNY                                  

9238863  LiquiChip, Premium Agreement     The Premium Cover Agreement LiquiChip provides full service coverage for the LiquiChip workstation. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. The agreement also includes one annual preventive maintenance visit, with costs for labor ａnd parts covered. With a Full Agreement, there is a priority response time of 24 hours (1 working day).     CNY                                  

5000-1251      Motor Control PCB, DML2          CNY                                  

5000-1513      H-Spring, DML2           CNY                                  

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5000-1417      Overlay 099A, VTX2            CNY                                  

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9240717  Lead Screw Assy, Axis 5, TR, AP        CNY                                  

9240703  O-Ring, Valve, Reagent Pump, AP        CNY                                  

9020806  Rotor Timing Calibration Dye, RGQ            CNY                                  

338134    Microbial DNA Positive Control           CNY                                  

288105    bactotype Mycoplasma Mg/Ms PCR Kit (96)              CNY                            【直肠粘膜上皮细胞】      

275002    flocktype NDV Ab (2)           CNY                                  

285515    cador C. burnetii PCR Reagent (96)             CNY                                  

285115    cador TKP PCR Reagent (96)              CNY                                  

9001901  #QIAgility (PC) Priority QIAgility (PC) Priority includes the QIAgility instrument, installation ａnd extended warranty. Installation covers hardware ａnd software installation of system ａnd provides user with introductory training. Priority package extends warranty period of the system to 2 years. One on-site pipetting head service is included for each year of the warranty; 2 pipetting head services in total. Service package includes all parts, labor ａnd travel costs with an on site service response time of 48 hours (2 working days). Performance of the installation ａnd service visits are documented on a GMP/GLP-compliant Field Service documents.       CNY                                  

800331    PCR Amplification         CNY                                  

9019489  ZLV PLATE ADAPTOR BIOHIT          CNY                                  

9019544  ZLV Skirt, low raw white 2427, CASx         CNY                                  

9019580  ZLV Reed Switch assembly, C34          CNY                                  

9020583  X-Belt, DML3000 185 Teeth         CNY                                  

9020592  Optical Head Assembly, DML 3000              CNY                                  

9021015  Encoder, Z Axis, VR, DCU           CNY                                  

9013209  Cabling kit, 5V/24V, BR8000         CNY                                  

9013189  Wheel, retractable tubing, dispenser, BR              CNY                                  

9011757  Reagent holder, 1-trough 20 ml     Holder for accommodating a single disposable trough (20 ml) on the worktable; must be used with the reagent holder tray   CNY                                  

132632    NeXtal Stock Potassium formate (50)   10M Potassium formate - 50mL (4 x 12,5 ml tube)     CNY                                  

761125    PAXgene Blood DNA Tube (100)  100 PAXgene Blood DNA Tubes   CNY                            【直肠粘膜上皮细胞】      

QTR-919 癌胚抗原(CEA)检测卡  1T   20T、50T/盒                      

QTR-920 前列腺特异性抗原(PSA)检测卡  1T   20T、50T/盒                      

QTR-921 布病阻断ELISA抗体检测试剂盒                                         

QTR-922 贾弟虫抗原检测试纸条                                          【直肠粘膜上皮细胞】

QTR-923 A型轮状病毒ELISA抗原检测试剂盒                                         

QTR-924 A型轮状病毒抗原检测试纸条                                      

QTR-925 西尼罗河热阻断ELISA抗体检测试剂盒                                     

QTR-926 小球隐孢子虫检测试剂条                                      

QTR-927 A型流感阻断ELISA抗体检测试剂盒                                         

QTR-928 猪胸膜肺炎放线杆菌iELISA抗体检测试剂盒（10,12型）                                      

QTR-929 猪胸膜肺炎放线杆菌iELISA抗体检测试剂盒（1,2,9,11/3,6,8,15/4,5,7型）                                   

QTR-930 猪伪狂犬病病毒(全)抗体检测试剂盒                                   

QTR-931 猪伪狂犬gB-ELISA抗体检测试剂盒                                    

QTR-932 猪伪狂犬gE-ELISA抗体检测试剂盒                                    

QTR-933 非洲猪瘟抗原检测ELISA试剂盒                                         

QTR-934 非洲猪瘟cELISA抗体检测试剂盒                                       

QTR-935 非洲猪瘟病毒抗体检测试纸条                                      

QTR-936 猪布病iELISA抗体检测试剂盒                                    

QTR-937 副猪嗜血杆菌iELISA抗体检测试剂盒                                        

QTR-938 流感iELISA抗体检测试剂盒                                         【直肠粘膜上皮细胞】

QTR-939 双抗夹心法猪圆环病毒抗原检测试剂盒                                      

QTR-940 PCV-2 IgG/IgM抗体检测试剂盒                                   

QTR-941 PCV-2 IgG抗体检测试剂盒                                   

QTR-942 猪丹毒iELISA抗体检测试剂盒                                    

QTR-943 猪肺炎支原体ELISA抗体检测试剂盒                                         

QTR-944 猪细小病毒iELISA抗体检测试剂盒                                    

QTR-945 猪细小病毒ELISA抗原检测试剂盒                                     

QTR-946 猪传染性胃肠炎/猪冠状病毒检测试剂盒（Porcine Coronavirus(PRCV/TGEV)）                                   

QTR-947 猪传染性胃肠炎和冠状病毒二联抗体检测试剂盒                                      

QTR-948 猪冠状病毒ELISA抗体检测试剂盒                                     

QTR-949 猪传染性胃肠炎ELISA抗体检测试剂盒