【胎盘绒毛膜细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【胎盘绒毛膜细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【胎盘绒毛膜细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【胎盘绒毛膜细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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130905    NeXtal DWBlock AmSO4 Suite            CNY                                  

130821    NeXtal CubicPhase 1w Mo/C 8% µplate (2)        CNY                                  

4523003  artus Infl./H1 LC/RG RT-PCR Kit (24) RUO              CNY                                  

4555063  artus M.tuberculosis LC PCR Kit (24) CE           CNY                                  

4555163  artus M.tuberculosis TM PCR Kit (24) CE          CNY                                  

130805    NeXtal CubicPhase 1w Mo µplate (100)             CNY                            【胎盘绒毛膜细胞】   

4518263  artus HCV RG RT-PCR Kit (24) CE             CNY                                  

4514303  artus BK Virus QS-RGQ Kit (24) RUO         CNY                                  

4510035  artus Enterovirus LC RT-PCR Kit (96) PRE         CNY                                  

4513366  artus HI Virus-1 QS-RGQ Kit (72) CE         CNY                                  

129073    MaXtract High Density (25 x 50 ml)            CNY                                  

4505003  artus HAV LC RT-PCR Kit (24) RUO           CNY                                  

4506303  artus HBV QS-RGQ Kit (24) RUO        CNY                                  

80224     AllPrep DNA/RNA/miRNA Universal Kit (50)             CNY                                  

79306     QIAzol Lysis Reagent (200 ml)            CNY                                  

74903     RNeasy Plant Mini Kit (20)    20 RNeasy Mini Spin Columns, 20 QIAshredder Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers       CNY                                  

74804     RNeasy Lipid Tissue Mini Kit (50) 50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), QIAzol Lysis Reagent, RNase-free Reagents ａnd Buffers  CNY                                  

27704     QIAprep Spin M13 Kit (50)   For 50 ssDNA preps: 50 QIAprep Spin Columns, Buffers, Collection Tubes (2 ml)   CNY                                  

27361     DirectPrep 96 Miniprep Kit (4)      For 4 x 96 plasmid minipreps: 4 DirectPrep 96 Plates, Reagents, Buffers, Flat-Bottom Blocks ａnd Lids, AirPore Tape Sheets, Tape Pads, Elution Microtubes RS, Caps       CNY                                  

19591     Caps for Elution Microtubes (50x8)             CNY                                  

19589     5-hole tube units (256)          CNY                                  

72022     Oligotex Direct mRNA Mini Kit     For 12 mRNA minipreps: 420 ul Oligotex Suspension, Small Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers       CNY                            【胎盘绒毛膜细胞】   

69985     Grinding Jar Set, S.Steel (2 x 10ml)            CNY                                  

19576     Round-Well Blocks (24) 96-well blocks with 1.2 ml wells, 24 per case. Used for lysis steps in the QIAamp 96 DNA Blood. Required for MagAttract 96 Miniprep Core Kit (PG 2003)   CNY                                  

19092     Pathogen Lysis Tubes L (50), KG         CNY                                  

12165     QIAGEN Plasmid Maxi Kit (100)  100 QIAGEN-tip 500, Reagents, Buffers      CNY                                  

10063     QIAGEN-tip 500 (25)    25 columns; 500 µg column capacity   CNY                                  

133285    NeXtalStock TRIS pH 9.0 (200)          CNY                                  

133279    NeXtalStock Succinic acid pH 7.0 (200)             CNY                                  

4504063  Artus Parvo B19 LC PCR Kit (24) CE          CNY                                  

4503003  artus CMV LC PCR Kit (24) RUO        CNY                                  

990399    Spin Column Adapter Rings (25)          CNY                                  

QY112-1 高纯度酵母质粒大提试剂盒       10T                            

QY113-1 革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒    "100T

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QY114-1 高纯度革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒       "100T

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QY115-1 革兰氏阳性菌质粒中量提取试剂盒    "100T

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QY116-1 高纯度革兰氏阳性菌质粒中量提取试剂盒       "100T

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QY117-1 革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒    10T                            

QY118-1 高纯度革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒       10T                            

QY119-1 96普通质粒小提试剂盒      "2板

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QY120-1 96酵母革兰氏阳性菌质粒小提试剂盒      "2板

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QY201-1 小量DNA产物纯化试剂盒  "100T

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QY202-1 小量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒     "100T

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QY203-1 大量DNA产物纯化试剂盒  "100T

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QY204-1 多功能DNA纯化回收试剂盒     "100T

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QY205-1 小分子量DNA，片段纯化回收试剂盒      "100T

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QY206-1 玻璃奶DNA产物纯化回收剂盒  "100T

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QY301-1 细菌基因组DNA提取试剂盒     "100T

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QY302-1 酵母基因组DNA提取试剂盒     "100T

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QY303-1 革兰氏阳性细菌基因组DNA提取试剂盒  "100T

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QY304-1 血液基因组DNA小量提取试剂盒(离心柱型)   "100T

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QY306-1 血液基因组DNA大量提取试剂盒(离心柱型)   "100T

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QY307-1 动物组织基因组提取试剂盒       "100T

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QY308-1 细胞基因组提取试剂盒       "100T

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QY309-1 植物基因组DNA提取试剂盒     "100T

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QY310-1 快捷植物基因组DNA提取试剂盒     "100T

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QY311-1 血液细胞组织基因组DNA提取试剂盒     "100T

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QY312-1 微量样品基因组DNA提取试剂盒     "100T

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QY313-1 血液基因组DNA非离心柱型（0.1~20ml）      "100ML

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QY314-1 血凝块基因组DNA提取试剂盒  "100T

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QY315-1 血浆游离基因组DNA提取试剂盒     "100T

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QY316-1 M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒  "100T

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"                   【胎盘滋养层细胞】

QY110-1 高纯度酵母质粒中量提取试剂盒    "100T

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QY111-1 酵母质粒大量提取试剂盒  10T