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【子宫成纤维细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：
1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。
2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。
3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。
4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。
5. 定期检测下列项目：
5.1. CO2钢瓶的CO2压力
5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。
5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。
6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。
【子宫成纤维细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！
一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书
二、客户自备试剂
1、PBS
2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗
3、0.25% （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）
三、细胞背景
1、生长方式：贴壁
2、种属：Homo sapiens 人
四、培养条件
1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗
2、温度：37.0°C
3、气体:空气 95%，CO2 5%
【子宫成纤维细胞】五、培养方法
收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：
1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。
2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml 含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。
3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养
4，传代比例：1:2-1:3
七、常见问题及解决方案
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
细胞培养代理品牌
| | BD 产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学和蛋白质组学等诸多领域，旗下拥有Clontech 、Discovery labware 、Pharmingen 、Falcon 等质品牌，值得称赞的是每一个品牌在其所在的领域都是其中的佼佼者。 |
细胞培养代理品牌
| | GIBCO 作为细胞培养的金字招牌，是在此领域的领导者，现在是Invitrogen的一部分。Gibco可以提供*为广泛的品种以满足用户不同的需求，每一种产品都通过*为严格的品质管理。同时，Gibco也可按客户的要求对培养基的配方进行改动，或完全按客户的配方进行生产。 |
【子宫成纤维细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com
9015382 Cover, heat/cool unit, M96 CNY
9018396 BioCalculator, Software CD, QIAxcel CNY
9012274 Power supply (6A), color code 9170 CNY
37900 Qproteome Bacterial Protein Prep Kit CNY 【子宫成纤维细胞】
9015337 Regulator, DC5V CNY
9015323 O-rings, plunger fixing, M48 (6) CNY
133035 NeXtalStock Ammonium phosphate (200) CNY
133033 NeXtalStock Cobalt(II) Chloride (200) CNY
9001637 Rotor-Gene Q 2plex HRM (w/o PC) System Rotor-Gene Q 2plex HRM (w/o PC) System includes the Rotor-Gene instrument ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It covers the handling of the Rotorgene-Q systems hardware ａnd trains the user on operation of the Rotorgene software. All travel ａnd labor cost included for Installation ａnd service documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document. CNY
239045 GelPilot 100 bp Plus Ladder (100) Ready-to-use DNA marker, 600µl (100lanes), 11 fragments: 100 – 1500 bp CNY
9015311 Unit, spotlight, left, M48 CNY
133147 NeXtalStock Ammonium sulfate (200) CNY
133145 NeXtalStock ADA pH 6.0 (200) CNY
133018 NeXtalStock Ammonium nitrate (200) CNY
1034963 Buffer PKD (15/15),KG CNY
950140 Binding Additive (DX) (4.0 g) CNY
9018318 Fuses 4A, centrifuge board (220V), QIAC CNY
9015378 D-module, M96 CNY
9015369 Filter, HEPA, before S/N 8, M96 CNY
133158 NeXtalStock CAPS pH 10.0 (200) CNY 【子宫成纤维细胞】
133156 NeXtalStock BIS-TRIS Propane pH8.5 (100) CNY
133151 NeXtalStock BIS-TRIS pH 6.5 (100) CNY
133074 NeXtalStock PEG 1,000 (200) CNY
133071 NeXtalStock Nickel(II) chloride (200) CNY
870111 therascreen EGFR RGQ PCR Kit CE (24) CNY
805923 REPLI-g Service, Single Tube (100 µg) CNY
9015356 Interlock switch 2, for maintenance CNY
9015345 Board, PSB CNY
133042 NeXtalStock DL-Malic Acid (200) CNY
133037 NeXtalStock Dimethyl sulfoxide (200) CNY
9018394 Key, User, red, QIAxcel FA CNY
9018337 Tubing, Valve to injection needle (set) CNY
9001669 Rotor-Gene Q 6plex (w/o PC) PrioPLUS "Rotor-Gene Instrument
Installation of Rotor-Gene & Introductory training
Warranty extension to 3 yrs
Loaner available in 2 days*
Annual Inspections (1 onsite PM per yearr)
Priority service provision over non-contract customers
Documented installation & PM report
Unlimited number of repair service
All cost covered (travel, labor, parts)" CNY
QT101-6 TUREscript One Step RT-PCR Kit（一步法反转录试剂盒） 2050 【子宫成纤维细胞】
QT101-8 TUREscript SY Green qRT-PCR Kit （两步法荧光定量反转录试剂盒） 2050
QD101-1 DNA MarkerⅠ（条带100.200.300.400.500.600） "50T
"
QD101-3 DNA Marker Ⅱ（条带100.300.500.700.900.1200） "50T
"
QD101-5 DNA Marker Ⅲ（条带300.500.800.1500.2000.3000.5000） "50T
"
QD101-7 DNA Marker Ⅳ（条带500.1000.1500.3000.5000.8000） "50T
"
QD101-9 DNA Marker Ⅴ（条带200.400.700.1000.1500.2000） "50T
"
QD101-11 DNA MarkerⅥ(条带250.1000.2500.5000.7000.10000) "50T
"
QD101-13 DNA Marker Ⅶ（条带300.500.1000.1500.2000.2500） "50T
"
QD101-17 50bp DNA Marker（条带50.100.150.200.250.300.250.400） "50T
"
QD101-19 50bp Plus（条带50.100.150.200.250.300.350.400.500.600.1000） "50T
"
QD101-21 100bp DNA Marker（100.200.300.400.500.600.700.800.900.1000.1500） "50T
"
QD101-23 100bp Plus（100.200.300.400.500.600.700.800.900.1000.1500.2000.3000.5000） "50T
"
QD101-25 200bp DNA Ladder "50T
"
QD101-27 250bp DNA Ladder（条带250.500.750.1000.1500.2000.2500.3000.5000） "50T
"
QD101-29 300bp DNA Ladder（条带300.600.900.1200.1500.1800.2500.3000.5000） "50T
"
QD101-31 500bp DNA Ladder（500.1000.1500.2000.2500.3000.3500.5000） "50T
" 【子宫成纤维细胞】
QD101-33 1kb DNA Marker（条带1000.2000.3000.4000.5000.6000.8000.10000） "50T
"
QD101-35 1kb Plus（条带300.500.800.1000.1500.2000.3000.4000.5000.6000.8000.10000） "50T
"
QD101-43 DL2000（条带100.250.500.750.1000.2000） "50T
"
QD101-45 DL2000 Plus （条带100.250.500.750.1000.2000.3000.5000） "50T
"
QH406-1 λDNA/HindⅢ "50T
"
QH406-3 pUC19 DNA/MspⅠ "50T
"
QC101-01 DH5α感受态细胞 40×100ul
QC102-01 Top10感受态细胞 40×100ul
QC103-01 JM109感受态细胞 20×100ul
QC104-01 BL21(DE3)感受态细胞 20×100μl
QC105-01 BL21(DE3) Competent cell 20×100ul
QC121-01 高效感受态细胞制备试剂盒 100×100μl
QC201-1 pSURE -T 载体连接试剂盒 20次
QC201-3 pSURE-T Simple载体连接试剂盒 20次(带T4 ligase）
