【乳腺成纤维细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【乳腺成纤维细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【乳腺成纤维细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【乳腺成纤维细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9019331  EPROM, IC Motherbrd, state FW, RG6              CNY                            【乳腺成纤维细胞】   

9019237  Linear guide - X, PyroQ24           CNY                                  

9234673  X-Assembly Turntable Card         CNY                                  

9234659  Cassette, HSPS, click＇n＇go            CNY                                  

QC151    PVDF膜 20cm×20cm（25张）                                  

QC152    硝酸纤维素膜（NC）  20cm×20cm（10张）                                  

QC153    硝酸纤维素膜（NC）  20cm×20cm（25张）                                  

QKG-01  Drop PCR Mix (Dye)     规格：5ml                                

QKG-02  Taq DNA Polymerase     规格：2500U                            

QKG-03  Taq DNA Polymerase (for PAGE) 规格：2500U                                       

QKG-04  2×Taq MasterMix (Dye)      规格：25ml                                【乳腺成纤维细胞】

QKG-05  2×Taq MasterMix 规格：5ml                                

QKG-06  2×Taq MasterMix (for PAGE)     规格：5ml                                

QKG-07  Es Taq DNA Polymerase       规格：2500U                            

QKG-08  2×Es Taq MasterMix (Dye)  规格：25ml                               

QKG-09  2×Es Taq MasterMix    规格：5ml                                

QKG-10  2×Es Taq MasterMix (for PAGE) 规格：5ml                                

QKG-11  LAmp DNA Polymerase 规格：500U                              

QKG-12  2×LAMP MasterMix (Dye)  规格：5ml                                

QKG-13  Pfu DNA Polymerase     规格：500U                                 

QKG-14  2×Pfu MasterMix (Dye)      规格：5ml                                

QKG-15  2×Pfu MasterMix  规格：5ml                                

QKG-16  SuperRT Reverse Transcriptase    规格：25次                              

QKG-17  SuperRT cDNA Synthesis Kit       规格：25次                              

QKG-18         规格：100次                            

QKG-19  SuperRT One Step RT-PCR Kit     规格：100次                            

QKG-20  SuperQuickRT cDNA链合成试剂盒(for Real-Time PCR)  规格：100次                             【乳腺成纤维细胞】

QKG-21         规格：25次                              

QKG-22  SuperQuickRT MasterMix(for Real-Time PCR)   规格：25次                              

QKG-23         规格：100次                            

QKG-24  HiFiMMLV cDNA Synthesis Kit    规格：100次                                      

QKG-25  HiFi-MMLV一步法RT-PCR试剂盒    规格：100次                            

QKG-26  HiFiScript cDNA Synthesis Kit      规格：25次                              

QKG-27         规格：100次                            

QKG-28         规格：500次