高回收率(75%-105%)，多种样品的低成本提取方法；高重复性；检测过程只需要不到1.5小时；五合一处理方法更省时、经济、环保。

产品概述

恶喹酸检测试剂盒酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有恶喹酸检测试剂盒(SEM)的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有SEM，会竞争SEM抗体，抑制SEM-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中SEM的浓度成反比。

 试剂盒组成

已包被的酶标板（可拆式）                                            12×8 孔

标准液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可选                                        1×0.8ml

HRP酶标抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，

请将SEM-HRP酶标抗原放置-20℃或者冰冻保存。

检测试剂盒以外需要提供的设备或材料

1)      酶标仪(450 nm)

2)      恒温培养箱

3)      匀浆器

4)      蒸干器

5)      漩涡振荡器

6)      移液枪(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得*佳实验效果。

1)      标准品中含有恶喹酸检测试剂盒，请小心使用。

2)      不要使用过期的试剂盒。

3)      不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4)      尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)      水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6)      加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7)      孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8)      从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9)      将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

样品的准备【恶喹酸检测试剂盒】

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

1×样品提取液

按1：9的比例配制样品提取浓缩液和双蒸馏水。

1）饲料（用于检测添加到饲料中的鱼粉、虾粉或动物组织的SEM）

（1）    取0.5g匀质样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋振荡1min；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速涡旋震荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始样品）到另一试管（避免触及下层水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70 °C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，转速涡旋振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：4.0

2）鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）：可用于五合一前处理方法

（1）    称取1g匀浆样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋震荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3h，培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下（20-25℃）4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），如果出现乳化现象，上清液不足3mL，请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；（注：肝脏组织富含脂肪、色素等，为防止乳化现象，建议选用4mL正己烷溶解，涡旋震荡30秒后，再进行下一步操作）

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡1分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

稀释倍数：2.0

3）鸡蛋【恶喹酸检测试剂盒】

（1）    称取1g鸡蛋样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70℃减压蒸馏或60-70℃氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品抽提工作液体，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

4）蜂蜜

（1）    称取1g蜂蜜加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

5）牛奶

（1）    对于含脂牛奶，取待测牛奶样品3ml室温4000g，5min。除去上层脂肪层。（对于脱脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

6）血清【恶喹酸检测试剂盒】

（1）        称取1g血清加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）        50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）        室温下4000g离心10分钟；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）        加入1mL1×样品提取液，剧烈

（8）        振荡2分钟；

（9）        室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

7）尿样

（1）    取3ml尿样，4000g离心5min。

（2）    离心后称取1ml，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（5）    室温下4000g离心10分钟；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（8）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（9）    室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

检测步骤

试剂的准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测

\以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1）    加入100mL的标准品于所设定的孔中；

（2）    加入100mL的样品于所设定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（4）    室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（5）    洗板3次，每次应该加入250mL 1×洗液，*后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室温（22.5±2.5）°C避光孵育20分钟后，每孔加入100mL的终止液终止反应;

（8）    在450nm或450/650nm下读OD值 (读数前，用吸水纸将板底部的指痕和水分擦去，避免影响读数)。

10．结果计算【恶喹酸检测试剂盒】

（1）    分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

（2）    以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。

（3）    从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

（4）    样品检测下限计算方法如下：

样品检测下限 = (0.025ng/g) ´ (稀释倍数)

样品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀释倍数)

例如，肉类样品的稀释倍数是2.0,那么肉类样品的检测下限是0.05ppb,定量检测下限是0.2ppb。

9238832  BR 9600, Basic Agreement      The Basic Cover Agreement 9600 provides full service coverage for the BioRobot 9600. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. The agreement also includes one annual preventive maintenance visit, with costs for labor ａnd parts covered. With a Basic Cover Agreement, the response time is 5 working days.     CNY                             【恶喹酸检测试剂盒】

9238819  Rect. carrier for 5 glass tubes 25ml                   CNY                             

9237527  Software LiquiChip Workstation IS V2.2.          CNY                             

9237380  Installation, BR MDx & 2 react. setup     Installation ａnd training, including two customized reaction setup protocols         CNY                             

9237379  Installation, BR MDx & 1 react. setup     Installation ａnd training, including one customized reaction setup protocol CNY                             

9237378  BR MDx, Installation        The Installation, BR MDx facilitates the quick implementation of the BioRobot MDx into the lab routine by minimizing the instrument start-up phase. It covers the hardware ａnd software installation of the BioRobot MDx instrument ａnd provides the user with an introductory training on operation ａnd user maintenance. The installation includes labor ａnd travel costs. The performance of the installation process is documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.         CNY                             

9237175  Guard Fan, Platic XYP                CNY                             

9233209  Tubing, 3/2,                CNY                             

9233155  Power Cord, European              CNY                             

9236418  Board, CPU, TWI               CNY                             

9236345  Red LSR             CNY                             

9236166  Safety shield, RapidPlate          CNY                             

9230863  Anpressplatte Rose-80              CNY                             

9235538  Teaching Tool            CNY                             

9230282  Cable, RS323, robot to syringe pump, 225                CNY                             

5050-2002        hc2 Software V2 Package                  CNY                             

BS96RNA BioSprint 96 to RNA (384) - UDP               CNY                              【恶喹酸检测试剂盒】

9240730  Tubing, 1/4" OD, Red, AP          CNY                             

9240713  Poly Muffler Kit, AP96/196                 CNY                             

9240690  Bearings, Lead Screws, AP                CNY                             

9243654  Comprehen Valid., Other Quant. Sys.      """The Comprehensive Validation Support plan specific to a laboratory＇s needs will incorporate all of the requirements for the internal validation guidelines from the FBI＇s Quality Assurance Standards (QAS).

The Comprehensive Validation Support service includes all travel ａnd labor charges for up to 20 days by the QIAGEN Validation Team. Typically, one week will be required to extract, quantify, ａnd amplify the validation study samples ａnd may require multiple individuals. Usually, two weeks is required to analyze the data ａnd one week to write the final report. The expected time period to complete the Comprehensive Validation is six weeks. The actual time may vary depending on resource availability, including laboratory time dedicated to validation activities.

Lab Work – The QIAGEN specialist(s) will travel to the laboratory to conduct the on-site validation lab work. The QIAGEN specialist team will perform ａnd complete all extractions, quantifications, amplfications, ａnd capillary electrophoresis. The laboratory is responsible for providing systems/protocols that may be needed (generally laboratory SOPs, ex. interpretation guidelines). Additionally, the laboratory staff may be required to provide additional data needed for interpretation (ex. quantification/amplification/CE results) during the data review phase of the validation.

Once the final scope of the validation is determined, QIAGEN will provide a quote for all consumables required for the validation.  Non-QIAGEN chemistry ａnd accessories are not included ａnd should  be purchased to cover the validation experimental design including qPCR, STR, NIST standards, required samples types (blood, semen, buccal samples) ａnd required substrates (swabs, materials, etc).   For planning purposes ａnd to ensure a smooth process, the Customer is expected to have all materials on-hand ａnd inventoried one (1) week prior to the validation start date.

Data Analysis – The Comprehensive Validation Support plan encompasses data collection (quants, amps, CE) during the on-site visit. The laboratory may be responsible for sharing (typically electronically via e-mail) any validation data requested after the on-site visit. A QIAGEN specialist will complete all of the data analysis produced from the validation study design. This includes qPCR (quant) ａnd STR (amp) analysis ａnd linkage to starting samples.

Validation data CD/flashdrive – QIAGEN will review the validation data ａnd draft a validation summary document, ensuring compliance with the FBI＇s QAS requirements/standards. QIAGEN will send validation data in an electronic format (email/CD/flashdrive) to the laboratory. The laboratory is responsible for final compilation, any format change preferences, review ａnd signoff of the validation report. The documentation provided by QIAGEN will aide in demonstrating compliance with all accreditation guidelines during laboratory audits. Should a hard copy of the validation study be preferred, the laboratory is required to specify prior to the onset of the validation.

Post-validation QIAGEN-to-Laboratory Transfer – Following completion of the validation ａnd generation of the draft validation summary document, a designated member of the QIAGEN validation team will review the validation with the Lab Manager ａnd the Technical Leader. Following sign off on the validation report, training of the laboratory DNA staff will occur. Refer to the Post-validation Competency Training for additional information. """     CNY                             

6000-5013        LumiCheck Plate User Package                  CNY                             

288103     bactotype Mycoplasma Mg/Ms PCR Kit (24)            CNY                             

1048147  QIAamp Viral RNA Mini Accessory Set              CNY                             

270043     cattletype BHV1 gB Ab (5)                CNY                             

1019992  Buffer Set (RNeasy 96 BioRobot 9604 Kit                  CNY                             

273401     pigtype Toxoplasma Ab (1)                CNY                             

273505     pigtype Trichinella Ab (20)                 CNY                             

9019538  ZLVBelting, flat cogged, 6T, 2.5mm, CASx                CNY                             

9020591  Tray Assembly, DML 3000                  CNY                             

9021007  Motor, Pipettor X, DCU             CNY                             

9013373  Fix kit, liquid handling, BR8000                 CNY                             

9013315  Motor, handler T/L, BR3000             CNY                              【恶喹酸检测试剂盒】

QY-x1723 狗肾细胞         MDCK                狗肾脏     DMEM＋10％NBCS                  

QY-x1724 人胚肾细胞（野生型）         293T-rex-wild-M2              人胚肾     DMEM＋10％NBCS                  

QY-x1725 人胚肾细胞（31位点突变）        293T-rex-S 31N                  人胚肾     DMEM＋10％NBCS                  

QY-x1726 人胃腺癌细胞         MCG803                                       

QY-x1727 人胃腺癌细胞         SCG-7901                                     

QY-x1728 人胃癌细胞(未分化)       HGC-27                                         

QY-x1729 人结肠癌细胞         Lovo                                     

QY-x1730 人结肠癌细胞         SW480                                           【恶喹酸检测试剂盒】

QY-x1731 人肝细胞癌细胞     BEL-7402                                     

QY-x1732 人肝细胞癌细胞     SMMC-7721                                         

QY-x1733 人肝癌细胞   QGY- 7701                                             

QY-x1734 人肝癌细胞     Hep-3b                                         

QY-x1735 转染四环素正向调控表达基因7402细胞   BEL-7402-Tet-on                                           

QY-x1736 转染绿色荧光蛋白和四环素正向调控表达基因7402细胞       7402-Tet-on-EGFP                                        

QY-x1737 人胰腺癌细胞         Panc-1                                          

QY-x1738 人胰腺癌细胞         SW1990                                        

QY-x1739 人口腔上皮癌细胞         KB                                         

QY-x1740 人口底癌细胞耐药株［长春新碱（VCR）诱导高表达（p-gp）］     KV                                         

QY-x1741 人肺巨细胞癌细胞         HLAmP                                         

QY-x1742 人肺腺癌细胞         GLC-82                                          

QY-x1743 人肺腺癌细胞（转染TK基因的GLC-82细胞） GLC-82-TK                                             

QY-x1744 人鼻咽癌细胞（高分化）     CNE-1                                            

QY-x1745 人鼻咽癌细胞         SUME-a                                        

QY-x1746 人鼻咽癌细胞         HNE-2                                            【恶喹酸检测试剂盒】

QY-x1747 人慢性髓原白血病细胞         K562                                              

QY-x1748 人组织细胞淋巴瘤细胞         U937                                             

QY-x1749 人红白细胞白血病细胞Erythroleukemia    HEL                                              

QY-x1750 人急性T淋巴母细胞白血病细胞          MOLT-4                                         

QY-x1751 人急性早幼粒白血病细胞（悬浮）     NB4                                      

QY-x1752 人骨肉瘤细胞         SW1353                                        

QY-x1753 人白血病细胞         Daudi                                            

QY-x1754 转染了tk基因的SW038-C2细胞 SW038-C2-tk                                        

QY-x1755 人星形胶质细胞瘤细胞        SHC-44