高回收率(75%-105%)，多种样品的低成本提取方法；高重复性；检测过程只需要不到1.5小时；五合一处理方法更省时、经济、环保。

产品概述

勃地酮检测试剂盒酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有勃地酮检测试剂盒(SEM)的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有SEM，会竞争SEM抗体，抑制SEM-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中SEM的浓度成反比。

 试剂盒组成

已包被的酶标板（可拆式）                                            12×8 孔

标准液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可选                                        1×0.8ml

HRP酶标抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，

请将SEM-HRP酶标抗原放置-20℃或者冰冻保存。

检测试剂盒以外需要提供的设备或材料

1)      酶标仪(450 nm)

2)      恒温培养箱

3)      匀浆器

4)      蒸干器

5)      漩涡振荡器

6)      移液枪(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得*佳实验效果。

1)      标准品中含有勃地酮检测试剂盒，请小心使用。

2)      不要使用过期的试剂盒。

3)      不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4)      尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)      水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6)      加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7)      孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8)      从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9)      将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

样品的准备【勃地酮检测试剂盒】

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

1×样品提取液

按1：9的比例配制样品提取浓缩液和双蒸馏水。

1）饲料（用于检测添加到饲料中的鱼粉、虾粉或动物组织的SEM）

（1）    取0.5g匀质样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋振荡1min；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速涡旋震荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始样品）到另一试管（避免触及下层水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70 °C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，转速涡旋振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：4.0

2）鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）：可用于五合一前处理方法

（1）    称取1g匀浆样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋震荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3h，培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下（20-25℃）4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），如果出现乳化现象，上清液不足3mL，请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；（注：肝脏组织富含脂肪、色素等，为防止乳化现象，建议选用4mL正己烷溶解，涡旋震荡30秒后，再进行下一步操作）

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡1分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

稀释倍数：2.0

3）鸡蛋【勃地酮检测试剂盒】

（1）    称取1g鸡蛋样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70℃减压蒸馏或60-70℃氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品抽提工作液体，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

4）蜂蜜

（1）    称取1g蜂蜜加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

5）牛奶

（1）    对于含脂牛奶，取待测牛奶样品3ml室温4000g，5min。除去上层脂肪层。（对于脱脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

6）血清【勃地酮检测试剂盒】

（1）        称取1g血清加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）        50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）        室温下4000g离心10分钟；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）        加入1mL1×样品提取液，剧烈

（8）        振荡2分钟；

（9）        室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

7）尿样

（1）    取3ml尿样，4000g离心5min。

（2）    离心后称取1ml，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（5）    室温下4000g离心10分钟；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（8）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（9）    室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

检测步骤

试剂的准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测

\以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1）    加入100mL的标准品于所设定的孔中；

（2）    加入100mL的样品于所设定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（4）    室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（5）    洗板3次，每次应该加入250mL 1×洗液，*后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室温（22.5±2.5）°C避光孵育20分钟后，每孔加入100mL的终止液终止反应;

（8）    在450nm或450/650nm下读OD值 (读数前，用吸水纸将板底部的指痕和水分擦去，避免影响读数)。

10．结果计算【勃地酮检测试剂盒】

（1）    分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

（2）    以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。

（3）    从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

（4）    样品检测下限计算方法如下：

样品检测下限 = (0.025ng/g) ´ (稀释倍数)

样品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀释倍数)

例如，肉类样品的稀释倍数是2.0,那么肉类样品的检测下限是0.05ppb,定量检测下限是0.2ppb。

978776     PyroMark Custom Assay (200)          CNY                              【勃地酮检测试剂盒】

180514     GeneRead Size Selection Kit (50)              CNY                             

158788     Gentra Puregene Cell Kit Plus (6.7x109)           CNY                             

677791     ipsogen NPM1 mut B&D cDNA MutaQuant Stds              CNY                             

34366       TAGZyme DAPase Enzyme (50 Units)       For processing of approximately 1 g tagged protein: 50 units DAPase Enzyme, 20 mM Cysteamine-HCl (25 ml)    CNY                             

30761       Ni-NTA Superflow Cartridges (5x5 ml)               CNY                             

28304       QIAquick Nucleotide Removal Kit (50)     50 QIAquick Spin Columns, Buffers, Collection Tubes (2 ml)     CNY                             

9011538  Handler unit, BR8000                CNY                             

9013167  Tubing, waste, BR8000             CNY                             

9011415  Plate Turntable for Plato 1/3              CNY                             

9011410  Plate stacker, Detachable (open)              CNY                             

101.901-24U    #HLA-DQB1*0602; DQA1*0102 excl.Taq (24)                   CNY                             

9242761  #Warranty PLUS 2, Prem/RRL, 1PM,QSYM RGQ              CNY                             

675191     ipsogen ETV6-RUNX1 Standards               CNY                             

9011183  BGR Armabdeckung Plato 7              CNY                             

9011145  Holder, stop position magnet, cover, BR8                 CNY                             

9011039  Motor, Z, buffer track, BR8000                 CNY                              【勃地酮检测试剂盒】

150126     REPLI-g Screening Kit (200)     DNA Polymerase, Buffers, ａnd Reagents for 200 x 40 µl whole genome amplification reactions CNY                             

1014630  Buffer AP1 (200/250),KG           CNY                             

1012508  Penta.His Antibody 96 Plates (100)          CNY                             

997024     Filter-Tips, 1500 µl (1024)                 CNY                             

9018895  Rotor-Disc 100 Rotor                 CNY                             

9018569  Magnet unit, w reflector, EZ1a                 CNY                             

9013155  Calibration pyramid, v1.02                CNY                             

9013074  Magnet, 96-well, Type C           CNY                             

673113     ipsogen JAK2 MutaScreen RS Kit (19)                CNY                             

673223     ipsogen JAK2 MutaScreen EZ Kit (24) CE          CNY                             

672691     ipsogen RARA-PML bcr3 Standards          CNY                             

670115     ipsogen BCR-ABL1 Mbcr Kit (52)               CNY                             

380317     Investigator Triplex AFSQS Kit (400)                  CNY                             

9001527  PyroMark Q96 MD Automated        For performing automated pyrosequncing reaction on the Q96 MD      CNY                            

9001301  QIAsymphony AS               CNY                             

4883004  pg AIV-H5 RT-PCR ASSAY LE               CNY                              【勃地酮检测试剂盒】

QYS-03314        成纤维细胞转染试剂     FibroblastTransfectionKit         200Transfections                                 

QYS-03315        上皮细胞转染试剂盒     EpithelialCellTransfectionKit    100Transfections                                 

QYS-03316        间充质干细胞转染试剂盒     MesenchymalStemCellTransfectionKit    250Transfections                                 

QYS-03317        星形胶质细胞转染试剂盒     AstrocyteTransfectionKit          250Transfections                                 

QYS-03318        平滑肌细胞转染试剂盒         SmoothMuscleCellTransfectionKit   250Transfections                                 

QYS-03319        角质细胞转染试剂盒     KeratinocyteTransfectionKit    200Transfections                                 

QYS-03320        上皮细胞转染试剂盒     EpithelialCellTransfectionKit    250Transfections                                 

QYS-03321        体外管腔形成分析试剂盒     InVitroTubeFomationAssayAngiogenesisAssay        50tests/96wellplate                            【勃地酮检测试剂盒】

QYS-03322        I型胶原细胞粘附检测试剂盒       CollagenICellAdhesionAssay     48tests/48wellplate                            

QYS-03323        纤维粘连细胞粘附检测试剂盒     FibronectinCellAdhesionAssay 48tests/48wellplate                            

QYS-03324        胶原I-3D凝胶试剂盒    CollagenI-3DGellingKit    100mg                                 

QYS-03325        胶原I-细胞培养表面包被试剂盒 CollageI-CellCultureSurfaceCoatingKit    10mg                                   

QYS-03326        MTT细胞活力和增殖检测试剂盒         MTTCellViabilityandProliferationAssay   1000tests/96wellplate                                

QYS-03327        WST-1细胞活力和增殖检测试剂盒      WST-1CellViabilityandProliferationAssay          1000tests/96wellplate                                 

QYS-03328        细胞衰老检测试剂盒     CellSenescenceAssay        50tests/53mmplate                            

QYS-03329        LDH细胞毒性检测试剂盒     LDHCytotoxicityAssay      500tests/96wellplate                                   

QYS-03330        TUNEL色标法细胞凋亡检测试剂盒     ColorimetricTUNELApoptosisAssay 50tests/96wellplate                            

QYS-03331        活/死细胞检测试剂盒   Live/DeadCellStainingKit 1000tests/96wellplate                                

QYS-03332        细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒     Caspase-3Assay        100tests                              

QYS-03333        支原体PCR检测试剂盒         MycoplasmaPCRDetectionKit 100tests                              

QYS-03334        β-半乳糖苷酶比色检测试剂盒   Beta-GalactosidaseColorimetricAssay     50tests/53mmplate                            

QYS-03335        LDH细胞毒性检测试剂盒     LDHCytotoxicityAssay      500tests/96wellplate                                   

QYS-03336        硝基苯酸钠pNPP磷酸酶检测试剂盒  pNPPPhosphataseAssay   500tests/96wellplate                                   

QYS-03337        比色法GAPDH分析试剂盒   ColorimetricGAPDHAssay         100tests/96wellplate                                    【勃地酮检测试剂盒】

QYS-03338        超氧化物歧化酶分析试剂盒         SuperoxideDisutaseAssay         100tests                              

QYS-03339        过氧化氢酶活性分析试剂盒         CatalaseActivityAssay      100tests                              

QYS-03340        谷胱甘肽过氧化物酶分析试剂盒         GlutathionePeroxidaseAssay   100tests                              

QYS-03341        细胞色素C氧化酶含量试剂盒     CytochromeCOxidaseAssay      100Testsincuvette                              

QYS-03342        柠檬酸合成酶的检测试剂盒         CitrateSynthaseAssay       100Testsincuvette                              

QYS-03343        谷氨酸脱氢酶检测试剂盒     GlutamateDehydrogenaseAssay     100Testsin96-wellplat                                 

QYS-03344        己糖激酶检测试剂盒     HexokinaseAssay      100Testsin96-wellplat                                 

QYS-03345        萄糖-6-磷酸磷酸脱氢酶检测试剂盒    Glucose-6-phosphateDehydrogenaseAssay     100Testsin96-wellplat                                 

QYS-03346        黄嘌呤氧化酶分析试剂盒     XanthineOxidaseAssay     100Testsin96-wellplat