高回收率(75%-105%)，多种样品的低成本提取方法；高重复性；检测过程只需要不到1.5小时；五合一处理方法更省时、经济、环保。

产品概述

群勃龙检测试剂盒酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有群勃龙检测试剂盒(SEM)的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有SEM，会竞争SEM抗体，抑制SEM-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中SEM的浓度成反比。

 试剂盒组成

已包被的酶标板（可拆式）                                            12×8 孔

标准液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可选                                        1×0.8ml

HRP酶标抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，

请将SEM-HRP酶标抗原放置-20℃或者冰冻保存。

检测试剂盒以外需要提供的设备或材料

1)      酶标仪(450 nm)

2)      恒温培养箱

3)      匀浆器

4)      蒸干器

5)      漩涡振荡器

6)      移液枪(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得*佳实验效果。

1)      标准品中含有群勃龙检测试剂盒，请小心使用。

2)      不要使用过期的试剂盒。

3)      不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4)      尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)      水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6)      加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7)      孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8)      从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9)      将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

样品的准备【群勃龙检测试剂盒】

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

1×样品提取液

按1：9的比例配制样品提取浓缩液和双蒸馏水。

1）饲料（用于检测添加到饲料中的鱼粉、虾粉或动物组织的SEM）

（1）    取0.5g匀质样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋振荡1min；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速涡旋震荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始样品）到另一试管（避免触及下层水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70 °C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，转速涡旋振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：4.0

2）鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）：可用于五合一前处理方法

（1）    称取1g匀浆样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋震荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3h，培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下（20-25℃）4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），如果出现乳化现象，上清液不足3mL，请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；（注：肝脏组织富含脂肪、色素等，为防止乳化现象，建议选用4mL正己烷溶解，涡旋震荡30秒后，再进行下一步操作）

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡1分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

稀释倍数：2.0

3）鸡蛋【群勃龙检测试剂盒】

（1）    称取1g鸡蛋样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70℃减压蒸馏或60-70℃氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品抽提工作液体，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

4）蜂蜜

（1）    称取1g蜂蜜加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

5）牛奶

（1）    对于含脂牛奶，取待测牛奶样品3ml室温4000g，5min。除去上层脂肪层。（对于脱脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

6）血清【群勃龙检测试剂盒】

（1）        称取1g血清加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）        50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）        室温下4000g离心10分钟；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）        加入1mL1×样品提取液，剧烈

（8）        振荡2分钟；

（9）        室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

7）尿样

（1）    取3ml尿样，4000g离心5min。

（2）    离心后称取1ml，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（5）    室温下4000g离心10分钟；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（8）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（9）    室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

检测步骤

试剂的准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测

\以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1）    加入100mL的标准品于所设定的孔中；

（2）    加入100mL的样品于所设定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（4）    室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（5）    洗板3次，每次应该加入250mL 1×洗液，*后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室温（22.5±2.5）°C避光孵育20分钟后，每孔加入100mL的终止液终止反应;

（8）    在450nm或450/650nm下读OD值 (读数前，用吸水纸将板底部的指痕和水分擦去，避免影响读数)。

10．结果计算【群勃龙检测试剂盒】

（1）    分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

（2）    以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。

（3）    从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

（4）    样品检测下限计算方法如下：

样品检测下限 = (0.025ng/g) ´ (稀释倍数)

样品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀释倍数)

例如，肉类样品的稀释倍数是2.0,那么肉类样品的检测下限是0.05ppb,定量检测下限是0.2ppb。

800090     Ready-Run Rxns.               CNY                             

765312     PAXgene TissueFIX Cont. (50 ml) Kit                  CNY                             

132009     EasyXtal 15-Well Tool X-Seal (100)   "100 empty 15-well crystallization plates with X-Seal crystallization supports (5 boxes of 20)

For manual setup of hanging ｄrop crystallization experiments."    CNY                              【群勃龙检测试剂盒】

762931     Buffer BM3 Wash buffer 8 x 150 ml conc.                 CNY                             

204054     QuantiFast SYBR Green PCR Kit (400)               CNY                             

203741     QIAGEN Fast Cycling PCR Kit (50)    "Trial Kit: For 50 x 20 µl reactions: 1 x 0.5 ml Fast Cycling Master Mix (2x), RNase-free water, 10 x CoralLoad Fast Cycling Dye, 5 x Q-Solution

-to be used as sample Kit"        CNY                             

159340     Sterile Foam-Tipped Swabs (100)              CNY                             

158906     Cell Lysis Solution (125 ml)                 CNY                             

35061       Ni-NTA HisSorb Plates (5)          5 Ni-NTA-coated, transparent 96-well plates  CNY                             

678891     ipsogen MLL-DUP e2e8 Standards            CNY                             

678591     ipsogen MLL-AF9 e8e10 Standards           CNY                             

678191     ipsogen MLL-AF4 e10e4 Standards           CNY                             

34460       Penta.His HRP Conjugate Kit   125 ul Penta-His HRP Conjugate, 5 g Blocking Reagent, 50 ml Blocking Reagent Buffer (10x concentrate)    CNY                             

32746       EasyXpress Linear Template Fab Kit (100)                 CNY                             

32501       EasyXpress Protein Synthesis Kit (5)         "- Kit for cell-free protein expression in E.coli cell-free extracts.

- The same as the EasyXpress Protein Synthesis Kit (20) (former EasyXpress Protein Synthesis Mini Kit), but only 5 instead of 20 reactions

- Ideal for testing ａnd expression of QIAgenes"       CNY                             

30900       Glutathione HiCap Matrix (10 ml)             CNY                             

28181       QIAquick 96 PCR Purification Kit (4)         For purification of 4 x 96 PCR reactions: 4 QIAquick 96 Plates, Buffers, Collection Microtubes (1.2 ml), Caps        CNY                             

9011595  Tip adapter, 300 µl, 120 mm, v2.04                  CNY                             

9011565  Shaker, 4-plate for Plato 7                 CNY                             【群勃龙检测试剂盒】

9013185  Tubing, waste, Dispense           CNY                             

9013174  Connector, tubing, 1-8, BR8000                CNY                             

9013169  Tubing, syringe inlet 1, BR8000                 CNY                             

9011433  BGR Z-Motor P1300 Spez. MWG              CNY                             

9011422  Tip Rack Holder, RCS1               CNY                             

9243119  Green Laser Contr. Coherent 115M-13, LC               CNY                             

9243556  HC2, Full Agreement        "Service response time (on-site repair):not applicable

Periodic inspection/maintenance: yes, 1/agreement year

Cost coverage depot repair (parts, labor, packaging, shipping): yes, full coverage

For defect DML, after customer calling QIAGEN technical service hotline before 12 am:

- A special package containing a replacement unit shall be sent to the customer within 2 working days.

- Customer shall send the defect unit to QIAGEN Regional Repair Center following the instructions attached with the packaging.  

For DML owned by customer, QIAGEN Regional Repair Center will send back the repaired original unit to customers within 7-10 working days.

PC, Monitor, Heater, Shaker, Washer, Printer ａnd Votexer:

- A new unit shall be sent to customer within  7-10 working days at no extra cost

- Customer shall send the defect unit to QIAGEN for disposal

- On-site installation of PC ａnd application software is not covered by the agreement

The Preventive Maintenance (PM) service ensures the correct operation of the equipment. During the PM, all the instrument modules are inspected by a qualified QIAGEN service technician. The Preventive Maintenance is performed under the manufacturer guidelines ａnd documented according to GLP / GMP"    CNY                             

101.901-24       #HLA-DQB1*0602; DQA1*0102 incl.Taq (24)           CNY                             

9241033  #Tube insert, 11 mm, sample carr            CNY                             

9242760  #Warranty PLUS 1, Prem/RRL, 1PM,QSYM RGQ              CNY                             

677491     ipsogen NPM1 mut A gDNA MutaQuant Stds          CNY                             

9011164  Roller, deflection, X-drive, BR8000           CNY                             

9010980  BGR 1-er Shaker PK80 (1177)           CNY                             

133215     NeXtalStock MMT pH 9.0 (200)                 CNY                             

NG0361   Xmol/L草酸     6元/100ml                                           

NG0362   Hank’s液      24元/200ml                                         

NG0363   2,4－二硝基苯肼   8元/100ml                                           

NG0364   4.0mol/L氢氧化钠 8元/100ml                                           

NG0365   任氏液     6元/100ml                                           

NG0366   超氧化物歧化酶SOD检测试剂盒         1管 比色法                                

NG0367   丙二醛MDA检测试剂盒       1管 比色法                                

NG0368   黄嘌呤氧化酶XOD检测试剂盒    1管 比色法                                

NG0369   总抗氧化能力T－AOC检测试剂盒      1管 比色法                                

NG0370   羟自由基检测试剂盒     1管 比色法                                 【群勃龙检测试剂盒】

NG0371   髓过氧化物酶MPO检测试剂盒   1管 比色法                                

NG0372   过氧化氢酶CAT检测试剂盒          1管 紫外比色法                                

NG0373   谷胱甘肽－S转移酶GSH－ST检测试剂盒 1管 比色法                                

NG0374   谷胱甘肽过氧化物酶GSH－PX检测试剂盒         1管 比色法                                

NG0375   氧化型谷胱甘肽GSSG检测试剂盒       1管 比色法                                

NG0376   谷胱甘肽还原酶GR检测试剂盒  1管 比色法                                

NG0377   还原型谷胱甘肽GSH检测试剂盒         1管 比色法                                

NG0378   巯基-SH检测试剂盒       1管 比色法                                

NG0379   单胺氧化酶MAO检测试剂盒       1管 紫外比色法                                

NG0381   一氧化氮NO硝酸还原酶法检测试剂盒      1管 比色法                                

NG0382   一氧化氮合成酶诱导型检测试剂盒     1管 比色法                                

NG0383   一氧化氮合成酶总NOS检测试剂盒    1管 比色法                                

NG0384   乳酸LD血清、组织检测试剂盒  1管 比色法                                

NG0385   乳酸LD全血检测试剂盒       1管 比色法                                

NG0386   乳酸脱氢酶LDH检测试剂盒         1管 比色法                                

NG0387   ATP酶钠钾、钙镁ATP酶检测试剂盒  1管 比色法                                 【群勃龙检测试剂盒】

NG0388   钠钾、钙镁ATP酶中任一项检测试剂盒     1管 比色法                                

NG0389   超微量ATP酶检测试剂盒     1管 比色法                                

NG0390   钠钾、钙镁ATP酶中任一项检测试剂盒                                                   

NG0391   琥珀酸脱氢酶SDH检测试剂盒    1管 比色法                                

NG0392   肌酸激酶CK检测试剂盒       1管 比色法                                

NG0393   胆碱酯酶CHE检测试剂盒    1管 比色法                                

NG0394   乙酰胆碱酯酶T－CHE检测试剂盒       1管 比色法