高回收率(75%-105%)，多种样品的低成本提取方法；高重复性；检测过程只需要不到1.5小时；五合一处理方法更省时、经济、环保。

产品概述

沙门氏菌检测试剂盒酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有沙门氏菌检测试剂盒(SEM)的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有SEM，会竞争SEM抗体，抑制SEM-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中SEM的浓度成反比。

 试剂盒组成

已包被的酶标板（可拆式）                                            12×8 孔

标准液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可选                                        1×0.8ml

HRP酶标抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，

请将SEM-HRP酶标抗原放置-20℃或者冰冻保存。

检测试剂盒以外需要提供的设备或材料

1)      酶标仪(450 nm)

2)      恒温培养箱

3)      匀浆器

4)      蒸干器

5)      漩涡振荡器

6)      移液枪(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得*佳实验效果。

1)      标准品中含有沙门氏菌检测试剂盒，请小心使用。

2)      不要使用过期的试剂盒。

3)      不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4)      尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)      水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6)      加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7)      孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8)      从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9)      将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

样品的准备【沙门氏菌检测试剂盒】

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

1×样品提取液

按1：9的比例配制样品提取浓缩液和双蒸馏水。

1）饲料（用于检测添加到饲料中的鱼粉、虾粉或动物组织的SEM）

（1）    取0.5g匀质样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋振荡1min；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速涡旋震荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始样品）到另一试管（避免触及下层水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70 °C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，转速涡旋振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：4.0

2）鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）：可用于五合一前处理方法

（1）    称取1g匀浆样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋震荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3h，培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下（20-25℃）4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），如果出现乳化现象，上清液不足3mL，请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；（注：肝脏组织富含脂肪、色素等，为防止乳化现象，建议选用4mL正己烷溶解，涡旋震荡30秒后，再进行下一步操作）

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡1分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

稀释倍数：2.0

3）鸡蛋【沙门氏菌检测试剂盒】

（1）    称取1g鸡蛋样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70℃减压蒸馏或60-70℃氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品抽提工作液体，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

4）蜂蜜

（1）    称取1g蜂蜜加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

5）牛奶

（1）    对于含脂牛奶，取待测牛奶样品3ml室温4000g，5min。除去上层脂肪层。（对于脱脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

6）血清【沙门氏菌检测试剂盒】

（1）        称取1g血清加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）        50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）        室温下4000g离心10分钟；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）        加入1mL1×样品提取液，剧烈

（8）        振荡2分钟；

（9）        室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

7）尿样

（1）    取3ml尿样，4000g离心5min。

（2）    离心后称取1ml，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（5）    室温下4000g离心10分钟；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（8）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（9）    室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

检测步骤

试剂的准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测

\以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1）    加入100mL的标准品于所设定的孔中；

（2）    加入100mL的样品于所设定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（4）    室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（5）    洗板3次，每次应该加入250mL 1×洗液，*后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室温（22.5±2.5）°C避光孵育20分钟后，每孔加入100mL的终止液终止反应;

（8）    在450nm或450/650nm下读OD值 (读数前，用吸水纸将板底部的指痕和水分擦去，避免影响读数)。

10．结果计算【沙门氏菌检测试剂盒】

（1）    分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

（2）    以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。

（3）    从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

（4）    样品检测下限计算方法如下：

样品检测下限 = (0.025ng/g) ´ (稀释倍数)

样品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀释倍数)

例如，肉类样品的稀释倍数是2.0,那么肉类样品的检测下限是0.05ppb,定量检测下限是0.2ppb。

180962     GeneRead Gene Panel Mastermix (0.6 ml)               CNY                             

159310     Multibarrier Pouch Large (100)                 CNY                             

158922     RNase A Solution (650 µl)                  CNY                             

158912     Protein Precipitation Solution (350 ml)             CNY                             

9236427  Finger pads, set (8), TWI          CNY                             

9236242  O-Ring, Drawer, BR8 RD          CNY                             

9236163  Spill resistance upgrade kit, RapidPlate            CNY                             

9236156  Tool, calibration, vertical, RapidPlate               CNY                             

9235699  Power Cable, RCS1            CNY                             

9235474  Microplate adapter, 384-well plate                   CNY                             

9235330  96-well Centrifuge Adaptor 2.01     Black in color   CNY                             

9235299  Plunger tip, syringe 1.0 ml                 CNY                             

9235106  Manual, user, hardware BR8000 US                 CNY                             

9234887  T-piece, vacuum tubing, connector          CNY                             

9238668  Control knob              CNY                              【沙门氏菌检测试剂盒】

9238650  Main switch ETA, 16 A               CNY                             

9238638  Microswitch              CNY                             

9241894  QIArent&go - Rent out fee PyroMark               CNY                             

9240908  Upgrade QIAplex MDD             CNY                             

9240973  Solenoide, sample tracking, Qsym            CNY                             

9240964  Motor, z, pipetting system, Qsym             CNY                             

9240913  Battery, PC-104, AP196/98                 CNY                             

9240679  Bimba Rotary Actuator, Magnetic, AP96                  CNY                             

9240778  Solid State Relay Update, AP98                 CNY                             

6000-5010        Reagent Trough Lids                  CNY                             

6000-5007        Collection Tube Cap (ｄrop on caps)           CNY                             

9241393  Channel, pipetting system, Qsym              CNY                             

9241364  Foil, keypad, EZ1a             CNY                             

9241362  Underlay, key panel, EZ1a                 CNY                             

9240755  Downtube, Reagent #2-6, AP96/196                 CNY                             

9240753  Downtube, Reagent #1, AP98                   CNY                              【沙门氏菌检测试剂盒】

9242199  Shock mounts, Eppendorf, AP196/98                  CNY                             

5000-1325        Board Regulator 230V, SKR1            CNY                             

EK0544     hVEGFR-ELISA 人VEGFR2/KDRELISA试剂盒 Human VEGFR2/KDR ELISA Kit         96 tests                      

EK0561     hECad-ELISA     人钙粘附蛋白ELISA试剂盒  Human E-Cadherin ELISA Kit   96 tests                      

EK0563     hCT1-ELISA       人心营养素-1ELISA试剂盒    Human Cardiotrophin-1 ELISA Kit    96 tests                      

EK0573     hCD40L-ELISA  人可溶性CD40LELISA试剂盒        Human soluble CD40L ELISA Kit       96 tests                      

EK0575     hEGVEGF-ELISA        人内分泌腺来源的血管内皮生长因子ELISA试剂盒  Human EG-VEGF ELISA Kit       96 tests                     

EK0581     hRes-ELISA       人抵抗素ELISAELISA试剂盒 Human Resistin ELISA Kit         96 tests                       【沙门氏菌检测试剂盒】

EK0584     hTNF         人TNFβELISA试剂盒    Human TNFβ ELISA Kit 96 tests                      

EK0588     hVEGFC-ELISA  人VEGF-CELISA试剂盒  Human VEGF-C ELISA Kit 96 tests                      

EK0641     hSurv-ELISA      人生存素ELISA试剂盒  Human Survivin ELISA Kit         96 tests                      

EK0642     hTSP2-ELISA     人TSP2ELISA试剂盒       Human TSP2 ELISA Kit     96 tests                      

EK0644     hCD105-ELISA  人CD105ELISA试剂盒   Human CD105 ELISA Kit  96 tests                      

EK0658     hAPP-ELISA       人APP ELISA试剂盒       Human APP ELISA Kit       96 tests                      

EK0663     hBAFF-ELISA     人 BAFF ELISA试剂盒    Human BAFF ELISA Kit     96 tests                      

EK0667     hPCad-ELISA     人P-CadherinELISA试剂盒     Human P-Cadherin ELISA Kit   96 tests                      

EK0702     hCD40-ELISA    人CD40ELISA试剂盒      Human CD40 ELISA Kit    96 tests                      

EK0706     hNCAM-ELISA  人CD56/NCAM-1ELISA试剂盒        Human CD56/NCAM-1 ELISA Kit      96 tests                      

EK0744     hcMet-ELISA    人c-Met/HGFRELISA试剂盒 Human c-Met/HGFR ELISA Kit         96 tests                      

EK0756     hErbB2-ELISA   人ErbB-2/Neu2ELISA试剂盒 Human ErbB-2/Neu2 ELISA Kit         96 tests                      

EK0757     hFeuA-ELISA     "人胎球蛋白AELISA试剂盒

"       HumanFetuin-A ELISA Kit         96 tests                      

EK0770     hHBEGF-ELISA 人肝素结合表皮生长因子ELISA试剂盒      Human HBEGF ELISA Kit 96 tests                      

EK0777     hIL6Ra-ELISA   人IL-6RaELISA试剂盒 Human IL-6Ra ELISA Kit  96 tests                     

EK0779     hIL7-ELISA        人IL-7ELISA试剂盒       Human IL-7 ELISA Kit       96 tests                       【沙门氏菌检测试剂盒】

EK0799     hIL27-ELISA      人IL-27ELISA试剂盒    Human IL-27 ELISA Kit     96 tests                      

EK0807     hCSF1R-ELISA   人CSF1R/M-CSFRELISA试剂盒      Human CSF1R/M-CSFR ELISA Kit      96 tests                      

EK0816     hKal3-ELISA      人Kallikrein 3ELISA试剂盒     Human Kallikrein 3 ELISA Kit   96 tests                      

EK0829     hRANK-ELISA   人 Receptor Activator of NF-κB (RANK)ELISA试剂盒 Human Receptor Activator of NF-κB (RANK) ELISA Kit    96 tests                      

EK0850     hMPO-ELISA     人过氧化物酶ELISA试剂盒  Human Myeloperoxidase (MPO) ELISA Kit       96 tests                      

EK0859     hPAI1-ELISA      人PAI-1ELISA试剂盒      Human PAI-1 ELISA Kit     96 tests                      

EK0867     hDKK1-ELISA    人DKK-1ELISA试剂盒    Human DKK-1 ELISA Kit   96 tests                      

EK0873     hPECAM-ELISA          人PECAM-1/CD31ELISA试剂盒      Human PECAM-1/CD31 ELISA Kit     96 tests                      

EK0884     hBMP7-ELISA   人BMP-7ELISA试剂盒   Human BMP-7 ELISA Kit  96 tests                      

EK0895     hp53-ELISA       人p53 ELISA试剂盒        Human p53 ELISA Kit       96 tests                      

EK0904     hCEA-ELISA       人CEAELISA试剂盒        Human CEA ELISA Kit       96 tests