标题ELISA试剂盒检验方法详解

ELISA试剂盒检验方法详解：

（1）使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

（2）取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

（3）空白对照孔加样品稀释液100μl，阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl，样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

（4）混匀，置37℃反应30分钟。

（5）扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。

（6）每孔加酶标记物100μl（空白孔除外），置37℃反应30分钟。

（7）洗涤，同步骤5。

（8）每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。

（9）每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

ELISA试剂盒实验加样须注意如下问题：

1、吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体，加样时不可90度向孔中滴加液体，这样会导致液体残留在吸头上，加样不准确。

2、不要将吸头伸入孔中，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面可能会将孔中的液体吹起来，加样不准确。

3、正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意：

1）角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确。

2）吸头应当贴着管壁和液面的交界处。

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