标题高效液相色谱法测定急支滴丸中柚皮苷的含量

【摘要】目的建立急支滴丸中枳壳主要成分柚皮苷含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法,KromasilC18（4.6mm×200mm,5μm）色谱柱,以甲醇-1%醋酸溶液（40∶60）为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为283nm。结果柚皮苷在0.07～0.35μg之间具有良好的线性关系,r＝0.9998,精密度试验RSD＝0.3%,稳定性试验RSD＝2.3%,重复性试验RSD＝1.29%,平均回收率为98.9%。结论该方法精确度、回收率高,稳定性、重复性好。
　　
　　【关键词】急支滴丸；高效液相色谱法；柚皮苷；含量测定
　　
　　ContentDeterminationofNaringininJizhiDroppillsbyHPLCBAIQing-yunJiangxiYichunCollege,Yichun336000,ChinaAbstract：ObjectiveToestablishHPLCmethodforthedeterminationofnaringininJizhidroppills.MethodsKromasilC18（4.6mm×200mm,5μm）wasused.Themobilephasewasconsistedofacetonitrile-1%acetatesolution（40∶60）.Theflowratewas1.0mL/min.TheUVdetectionwavelengthwasat283nm.ResultsThelinearrangefornaringinwas0.07～0.35μg,r＝0.9998.TheRSDofprecisiontestwas0.3%.TheRSDofstabilitytestwas2.3%.TheRSDofrepeatabilitytestwas1.29%.Theaveragerecoverywas98.9%.ConclusionThemethodofprecisionandrecoverywashigh,andstabilityandrepeatabilitywasgood.
　　
　　Keywords：Jizhidroppills；HPLC；naringin；contentdetermination
　　
　　急支滴丸是由急支糖浆改变剂型而来。急支糖浆为《中华人民共和国药典》所载成方,由四季青、鱼腥草、金荞麦、枳壳等组成,临床用于急性支气管炎、感冒咳嗽、夜间阵发性咳喘、慢性支气管炎急性发作以及咳痰不爽等症。为了控制改变剂型后的质量,我们采用高效液相色谱法对其主要成分柚皮苷进行了含量测定,现报道如下。
　　
　　1仪器与试药
　　
　　Agilent1100Series型高效液相色谱仪,二极管阵列紫外检测器（德国产）,电子天平。甲醇为色谱纯,醋酸为分析纯。急支滴丸（黑龙江中医药研究院制剂室提供）,柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所提供,批号110722-200309,供含量测定用,纯度为99.22%）。
　　
　　2方法与结果
　　
　　2.1色谱条件及系统适用性试验
　　
　　色谱柱：KromasilC18（4.6mm×200mm,5μm）,以甲醇-1%醋酸溶液（40∶60）为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为283nm,理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000[1]。色谱图见图1。
　　
　　2.2对照品溶液的制备
　　
　　精密称定适量柚皮苷对照品,加甲醇制成35μg/mL溶液即得。
　　
　　2.3供试品溶液的制备
　　
　　将急支滴丸研成粉末,精密称定0.1700g,置于50mL容量瓶中,加稀乙醇至刻度,摇匀,3000r/min离心,取上清液即得。
　　
　　2.4阴性对照品溶液的制备
　　
　　按“2.3”项下方法制备缺枳壳的阴性对照品溶液。
　　
　　2.5标准曲线绘制
　　
　　取柚皮苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成35μg/mL的溶液。分别精密吸取2、4、6、8、10μL,按“2.1”项下色谱条件,注入液相色谱仪测定。以进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程：Y＝610.7142X＋5.1500,r＝0.9998。结果表明,柚皮苷在0.07～0.35μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。
　　
　　2.6精密度试验
　　
　　精密吸取对照品溶液5μL,按“2.1”项下色谱条件进样测定,连续5次测定峰面积积分值。结果RSD＝0.3%,表明本方法精密度良好。
　　
　　2.7稳定性试验
　　
　　精密称取急支滴丸0.1703g,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件设定时间进样5次,每次精密进样10μL。结果RSD＝2.3%,表明供试品溶液在24h内稳定。
　　
　　2.8重复性试验
　　
　　分别精密称取同一批号急支滴丸5份,按“2.3”项下方法依法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样测定,每份连续进样2次。结果RSD＝1.29%,表明重复性良好。
　　
　　2.9加样回收率试验
　　
　　分别精密称取同一批号急支滴丸5份,每份约0.1700g,精密称定,分别加入柚皮苷对照品0.0642mg,混匀后,按照“2.3”项下方法制备供试品溶液溶液,按“2.1”项下色谱条件进样测定,结果见表1。5份供试品的平均回收率为98.9%,SX＝1.7535,RSD＝1.8%。表1加样回收率试验结果（略）
　　
　　2.10样品测定
　　
　　取本品10批,按照“2.3”项下方法制备溶液,按“2.1”项下色谱条件进样测定,结果见表2。表2柚皮苷含量测定结果（略）
　　
　　3讨论
　　
　　流动相系统参照文献[1-2]。选择几种不同比例的溶剂体系：乙腈-水-磷酸、甲醇-1%醋酸溶液、甲醇-水、甲醇-水-醋酸,根据分离情况,最终选择甲醇-1%醋酸溶液（40∶60）为流动相。
　　
　　根据供试品测定结果,10批供试品中柚皮苷含量的平均值为5.1989mg/g,考虑到投料药材不同及工艺的波动,按2005年版《中华人民共和国药典》（一部）规定,枳壳中柚皮苷含量不得低于4.0%,以此限度计算,制剂中柚皮苷含量应按降幅20%计为本品限定值,则其含量应不低于4.1591mg/g,按每丸0.05g计算,则每丸含枳壳以柚皮苷计应不低于0.2mg。本试验为急支滴丸质量标准提供了可行的量化指标。