一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/24 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，
特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一
种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理
NO在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2
—，在酸性条件下，NO2
—与重氮盐磺酸胺生成重氮
化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在 550nm 处有特征吸收峰，测定其吸光值，
可以计算 NO含量。为了排除样品色素等的影响，每个样品需做对照管。
一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书 自备实验用品及仪器
天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体 50mL× 1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 6mL× 1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 6mL× 1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 12mL× 1 瓶，4℃避光保存。
样品处理
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104
个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7
秒，总时间 3min） ；然后 10000g，4℃，离心 15min，取上清置于冰上待测。
3. 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。
一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书 测定步骤和操作表
对照管 测定管
样品（μL） 400 400
试剂一（μL） 250
试剂二（μL） 250
试剂三（μL） 250 250
混匀，4℃静置 15min，以对照管调零，1mL 玻璃比色皿，测定 A550。
NO 含量计算
标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2
= 0. 9986
1、组织样品：
NO含量定义： 25℃时，每克样品或每毫克蛋白15min生成1μmoL NO2
—
，相当于1μmoL NO。
（1）按样本质量计算
NO含量（μmoL/g 鲜重）=（A550 +0.0103）÷0.016×V反总÷（V样÷V 样总×W）×10-3
= 0.14×（A550 +0.0103）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
NO含量（μmoL/mg prot）=（A550 +0.0103）÷0.016×V反总÷（V样×Cpr）×10-3
= 0.14×（A550 +0.0103）÷Cpr
2、其他样品：
NO含量定义：25℃时，每升样品 15min 生成 1μmoL NO2
—
，相当于 1μmoL NO。
NO含量（μmoL/L）=（A550 +0.0103）÷0.016×V反总÷V样
=
140×（A550 +0.0103）
V反总：反应总体积，0.9mL；V样：反应中样品体积，0.4mL；V样总：加入提取液体积，
1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL
注意事项
1. 试剂盒 2-8℃保存。
2. 尽量使用新鲜样品进行检测，试剂三有腐蚀性，操作时请做好防护措施。
3. 若检测出得 OD值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释，并在计算公式
中除以浓缩倍数或者乘以稀释倍数。
4. 最低检出限为 0.65μmoL/L。
