标题ELISA试剂盒在使用中应该注意的问题

酶联免疫试剂盒是较普遍常用的药物残留检测方法，与仪器分析技术相比具有快速、简便、确和灵敏度高等特准点，但对实验操作条件的要求比较严格。实验条件主要由实验室的操作环境和操作人员的操作熟练程度两方面组成，但EIA试剂盒对实验室操作环境的要求是几种药物残留 LS检测方法中相对较低的。由于大部分的试验操作步骤都是由实验人员来完成的，人为的误差相对严重一些。本人结合几年的工作实践介绍一下进行EIA操作的时候应该注意LS的问题。

酶联免疫试剂盒操作的通用的规则：

1.孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准；

2.要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性；

3.又能反映出试剂盒的精密度；

4.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行；

5.验证

没有去离子水或双蒸水时：

1.可以使用娃哈哈纯净水配制溶液，切勿使用自来水；

2.使用试剂盒时出现问题的解决办法；3.

检测的结果没有吸光度值或吸光度值很低 .可能引起的原因有试剂盒已过有效期、使用的试剂盒内 容物不是同一个批次的、加入酶标记物、剂盒的内容物没试；

4.要确保微量加样器的准确性，可以使用蒸馏水和电子，天平进行确定 (由于蒸馏水不含杂质，温度环境为 2%左 0右时，m l L的水可以看作是 l、0 L的水可以看作是 g20 02 )每一把微量加样器都应该将其zui高量程和zui低量程 .g进行确定。

1.在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换；

2枪头，即使吸取标准品溶液。 1吸取液体时速度不易太快；

3.以免产生气泡，吸取的量不 够准确。

没有充分的回温、孵育的温度太低等，对应的解决办法是相更换成在有效期以内的试剂盒、使用同一个批次的试剂盒的内容物、照试剂盒说明书中的步骤进行操作、按将试剂盒的内容物充分的回温后再进行操作、在实验操作的整个过程中请仔细观察恒温箱的温度。

标准曲线的线性不好，或平行性不好 ( .双孔对照孔的 O D值差别很大)或 出现跳孔的现象，可能引起的原因有酶标板孔间相互污染、洗板后未能尽快进行下一步操作、添加样品或其它试剂时操作的方法不对、孵育位置避光性不佳或盖板膜没有密封好使得水分蒸发、酶标板孔问加入的试剂量不同，对应的解决办法是加相样时请小心勿将液体溅人另一孔中，人工洗板时也请小心， 勿将洗涤液溅人另一微孔中、在洗板后及时进行下一步操作、添加试剂时请悬空滴入，切记勿将枪头接触到板孔内，吸取不同试剂瓶中的液体时就要更换一次枪头、确认孵育环境不透光，盖板膜将酶标板密封好、使用已校正过的微量加样器，如将*次加入液体时枪头上留有一滴的液体滴下，那将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孑壁接触， L液滴会自然流下去。吸入液体时的zui好的方法是吸两档打一档，防止由于枪头的毛细作用使得部分液体不能流出而造成的误差。