小鼠4-羟雌二醇（4-HE2）试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：                                                           96T
20ng/L - 650ng/L 
 
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中 4-羟雌二醇（4-HE2）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠4-羟雌二醇（4-HE2）水平。用纯化的小鼠
4-羟雌二醇（4-HE2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入4-羟
雌二醇（4-HE2） ，再与HRP 标记的4-羟雌二醇（4-HE2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗
体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在
酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的4-羟雌二醇（4-HE2）呈正相关。用
酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠 4-羟雌二醇
（4-HE2）浓度。  
试剂盒组成  
1  30 倍浓缩洗涤液  20ml×1瓶  7  终止液  6ml×1 瓶
2  酶标试剂  6ml×1瓶  8  标准品（1200 ng/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12 孔×8条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 张    
6  显色剂B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个
标本要求  
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
600ng/L  5 号标准品  150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
300ng/L  4 号标准品  150µl的5 号标准品加入150µl标准品稀释液
150ng/L  3 号标准品  150µl的4 号标准品加入150µl标准品稀释液
75ng/L  2 号标准品  150µl的3 号标准品加入150µl标准品稀释液
37.5ng/L  1 号标准品  150µl的2 号标准品加入150µl标准品稀释液 
 2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50µl， 待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
然后再加待测样品10µl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。      
4.  配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。  
7.  温育：操作同3。
8.  洗涤：操作同5。
9.  显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.  终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔孔的OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6个月