植物全磷含量试剂盒说明书齐一生物
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率，进而为合理施肥提供依据。
植物全磷含量试剂盒说明书齐一生物测定原理：
植株样品用硫酸-过氧化氢消化，使各种形态磷转变成正磷酸盐，正磷酸盐与钼锑抗显色剂反应，生产磷钼蓝，蓝色溶液的吸光度与含磷量呈正比例关系，用酶标仪测定。
石墨消解仪、离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿 /96 孔板、蒸馏水和浓硫酸。
试剂组成和配置：
试剂一：液体 50ml
试剂二：液体 5ml
试剂三：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 0.2mL 蒸馏水溶解。
试剂四：液体 0.4mL×1 支，4℃保存。
工作液：临用前将试剂三和试剂四混合，加 19.4mL 蒸馏水混匀。（提供 20mL 棕色空瓶）
样本消化：
1.将植物样本 80℃烘干至恒重后粉碎，过 40 目筛，称取约 0.3g，加入消化管中，同时取空消化管两支，用移液管分别往每管中加入 10mL 浓硫酸，轻轻晃动消化管。
2.将 20 支消化管全部置于石墨消解仪上，盖好盖子，打开废气回收系统以及石墨消解仪，温度设置为：曲线加热 100℃，10min；280℃，10min；400℃，40min。
3.将消化管冷却至室温，切勿在样品冷却之前开盖。每支消化管中缓慢加入 1mL 试剂二，摇匀，重新放置在石墨消解仪上，温度设置为：曲线加热 200℃，10min；320℃，10min；
400℃，30min。
4. 取出消化管冷却至室温，切勿在样品冷却之前开盖。每支消化管中缓慢加入 0.5mL 试剂
二，摇匀，重新放置在石墨消解仪上，温度设置为：曲线加热 200℃，10min；320℃，10min
400℃，30min。若样本未呈现澄清状态，应重复步骤 4 至澄清，即消解完全。
5.关闭石墨消解仪，待样品冷却后关掉废气回收系统。
6.取 2mLEP 管，每个加 900uL 蒸馏水，再加 100uL 消解液混匀后，再加试剂一 500uL，混匀后待测。
植物全磷含量试剂盒说明书齐一生物测定操作表
空白管测定管
样本（μL）20
提取液（μL）20
工作液（μL）180180
充分混匀，25℃静置 30min
于微量石英比色皿/96 孔板，蒸馏水调零，测定 700nm 处吸光值 A，分别记为 A 空白管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 空白管
注意：空白管只需测定一次。计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.2936x +0.0012，R2 = 0.9989
全磷含量（g/kg）=（△A-0.0012）÷ 0.2936×V 总×V 样÷V 反总÷W×10-3×31
= 1.056×（△A-0.0012）÷W
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 总：加入提取液体积，100mL，W：样本质量，g b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1468x +0.0012，R2 = 0.9989
全磷含量（g/kg）=（△A-0.0012）÷ 0.1468×V 总×V 样÷V 反总÷W×10-3×31
= 2.112×（△A-0.0012）÷W
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 总：加入提取液体积，100mL，W：样本质量，g
注意事项
1.配好的试剂 3 天内使用完。
2.最低检出限为 0.25mg/Kg。
