超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）试剂盒说明书For Research Use only
仅供研究用
货号：QYS-23027
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）试剂盒说明书测定原理：
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子（O2-.），O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在 560nm 处有吸收；SOD 可清除 O2-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
可见分光光度计/酶标仪、离心机、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一： 5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×3 瓶，4℃保存，用时每支加 4mL 蒸馏水，充分溶解，现配现用；
试剂三：液体 200μL×1 支，4℃保存；
试剂四：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）试剂盒说明书1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂三用蒸馏水稀释两倍，用多少配多少。
3、 测定前将试剂一、二和四 37℃（哺乳动物）25℃（其他物种）水浴 5min 以上。
4、 样本测定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列试剂）
试剂名称（μL）测定管对照管
试剂一4545
试剂二100100
试剂三22
样本18
试剂四3535
蒸馏水18
充分混匀，室温静置 30min 后，560nm 处测定各管吸光值 A。
注意事项：
1、试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于 1，建议将试剂三用蒸馏水稀释 7 倍后使用（10μL 试剂三原液+60μL蒸馏水）。
SOD 活性计算：
1、抑制百分率的计算
抑制百分率＝（A 对照管－A 测定管） ÷A 对照管× 100%
尽量使样本的抑制百分率在 10-90% 范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 10% 或大于90% ，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需将样本用提取液适当稀释；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。
2、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位（U/mL）。
3、SOD 酶活性计算：
（1）血清（浆）SOD 活性（U/mL）=[抑制百分率÷（1－抑制百分率）×V 反总]÷V 样×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷（1－抑制百分率）×样本稀释倍数
（2）组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算：
a.按样本蛋白浓度计算
SOD 活性（U/mg prot）=[抑制百分率÷（1－抑制百分率）×V 反总]÷（V 样×Cpr）×样本稀释倍数
=11.11×抑制百分率÷（1－抑制百分率）÷Cpr×样本稀释倍数需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
b.按样本鲜重计算
SOD 活性（U/g 鲜重）=[抑制百分率÷（1－抑制百分率）×V 反总]÷（W ×V 样÷V 样总）×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷（1－抑制百分率）÷W×样本稀释倍数
c.按细菌或细胞个数计算
SOD 活力（U/104 cell）=[抑制百分率÷（1－抑制百分率） ×V 反总]÷（500×V 样÷V 样总）×样本稀释倍数=0.022×抑制百分率÷（1－抑制百分率）×样本稀释倍数
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.018mL；V 样总：
加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL ；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
