For Research Use Only
仅供研究用
货号：QYS-235027
总糖含量试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前请选择 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖也可称为碳水化合物，包括可溶性的单糖，二糖以及不溶性的淀粉，纤维素，几丁质等。
总糖含量试剂盒说明书
测定原理：
总糖酸水解为还原糖，在 NaOH 和丙三醇存在下，DNS 试剂与还原糖共热后被还原成氨基化合物，在过量的 NaOH 碱性溶液中呈桔红色，在 540nm 处有最大吸收峰，以此测定样品中的总糖含量。
可见分光光度计、沸水浴、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 50mL×1 瓶 ，4℃保存；
试剂三：液体 5mL×1 瓶 ，4℃避光保存；
样品中总糖的提取：
组织：称取约 0.1g 样品，加入 1mL 试剂一，1.5mL 蒸馏水，匀浆，95℃水浴中加热 30min，加入 1mL 试剂二，混匀，用蒸馏水定容至 10mL，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）
液体样本：直接检测。（注意稀释，见注意事项）
总糖含量试剂盒说明书
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、加样表：
试剂（μL）空白管测定管
样本40
蒸馏水8040
试剂三6060
混匀，置 95 度水浴中 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温
蒸馏水860860
混匀，540nm 测定吸光值，ΔA=A 测定管-A 空白管注意：1、空白管只要做一管。
2、如果 ΔA 大于 2，需要将上清液用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍
数。
总糖含量计算：
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.4503x - 0.0507；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、按样本鲜重计算：
总糖（mg /g 鲜重）= [（ΔA＋0.0507） ÷0.4503×V1]÷（W×V1÷V2）×稀释倍数=22.207×（ΔA＋0.0507） ÷W×稀释倍数。
3、按样本蛋白浓度计算：
总糖（mg /mg prot）=[（ΔA＋0.0507） ÷0.4503×V1]÷（V1×Cpr） ×稀释倍数=2.2207×（ΔA＋ 0.0507） ÷Cpr×稀释倍数。
V1：加入样本体积，0.04mL；V2：加入提取液体积，10mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
4、按照液体体积计算：
总糖（mg /mL）=[（ΔA＋0.0507） ÷0.4503×V1]÷V1×稀释倍数=2.2207×（ΔA＋0.0507）×稀释倍数。
总糖含量试剂盒说明书
注意：最低检测限为 1mg/g 鲜重或 10ng/mg prot
