维生素 B1（Vitamin B1，VB1）试剂盒说明书
分光光度法 50管/48 样
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
维生素 B1（Vitamin B1）是构成脱羧辅酶的主要成分，参与细胞代谢中的三羧酸循环，是维
持机体正常代谢必须的水溶性维生素，在生物体能量代谢中有重要的作用。
测定原理
VB1 在碱性条件下还原铁生成亚铁，亚铁与 Fe
3+
在弱酸条件下生成普
鲁士蓝，在 704nm有特征吸收峰。
维生素 B1（Vitamin B1，VB1）试剂盒说明书 自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体 35mL× 1瓶，4℃保存。
试剂一：液体 1mL× 1瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL× 1瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5mL× 1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体 12mL× 1瓶，4℃保存。
试剂五：液体 6mL× 1瓶，4℃避光保存。
样本处理
1. 组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约
0.1g，加入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于
25℃， 13000g离心10min， 取上清测定 （动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30
分钟） 。
2. 细胞：按照细胞数量（104
个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500
万细胞加入 0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3秒，间隔7 秒，
总时间3min） ；加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，13000g离心 10min，取上清测定。
3. 血清：直接测定。
维生素 B1（Vitamin B1，VB1）试剂盒说明书 测定操作
空白管 测定管
样品（μL） 100
试剂一（μL） 100
试剂二（μL） 80 80
试剂三（μL） 100 100
充分混匀，80℃反应10min
提取液（μL） 80 80
试剂四（μL） 220 220
试剂五（μL） 120 120
H2O（μL） 300 300
充分混匀，静置20min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 704nm处吸光值，
记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。
计算公式
标准曲线：y = 0.1902x - 0.1833，R2
= 0.9991
1. 按照蛋白含量计算
VB1含量（μg/mg prot）=（△A +0.1833）÷ 0.1902×V反总÷（V样× Cpr）
= 52.58×（△A +0.1833）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB1含量（μg/g）=（△A +0.1833）÷ 0.1902×V反总÷ （V样×W÷ V样总）
= 52.58×（△A +0.1833）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB1含量（μg/104
cell）=（△A +0.1833）÷ 0.1902×V反总÷（V样×细胞数量÷ V样总）
= 52.58×（△A +0.1833）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB1含量（μg/mL）=（△A +0.1833）÷ 0.1902×V反总÷V样
= 52.58×（△A +0.1833）
V反总：反应总体积，1mL； ：V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；
Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
维生素 B1（Vitamin B1，VB1）试剂盒说明书 注意事项
1. 若测定结果中吸光值超过 1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，
在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 显色完成后立即进行测定。
