桑葚超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子
发生岐化作用，生成H2O2和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成
酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理：
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.
)，O2-.
可还原氮蓝四唑生成蓝色甲
臜，后者在 560nm处有吸收；SOD 可清除O2-.
，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，
说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
桑葚超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）试剂盒说明书 需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制：
试剂一：15mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×5 瓶，4℃保存，用时每支加 5.4mL蒸馏水，充分溶解，现配现用；
试剂三：液体 350μL×1支，4℃保存；
试剂四：液体 10mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
按照组织质量（g） ：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，加入 1mL
蒸馏水），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2、 测定前将试剂一、二和四 37℃（哺乳动物）25℃（其他物种）水浴 5min以上。
3、 样本测定（在EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μL） 测定管 对照管
试剂一 240 240
试剂二 510 510
试剂三 6 6
样本 90
试剂四 180 180
蒸馏水 90
充分混匀，室温静置30min后，加入 1mL玻璃比色皿，560nm处测定各管吸光值 A。
桑葚超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）试剂盒说明书 注意事项：
1、试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
2、对照管只需要做一管。
3、若对照管吸光值大于2，建议将试剂三用蒸馏水稀释7 倍后使用（10μL试剂三原液+60μL
蒸馏水）。
SOD 活性计算：
1、抑制百分率的计算
抑制百分率＝(A对照管－A测定管) ÷A对照管× 100%
尽量使样本的抑制百分率在 30-70%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 30%或大于
70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需将样本用
蒸馏水适当稀释；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。
2、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系
中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位(U/mL)。
3、SOD 酶活性计算：
a.按样本蛋白浓度计算
SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷(V 样×Cpr)×样本稀释倍数
=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr×样本稀释倍数
需要另外测定，建议使用本公司 BCA蛋白质含量测定试剂盒。
b.按样本鲜重计算
SOD 活性(U/g 鲜重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)×样本稀释
倍数=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W×样本稀释倍数
V反总：反应体系总体积，1.026mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.09mL；V样总：
加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL ；W：样本质量，g。
