推荐：BIOHUB Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)
BIOHUB Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)是GMP别转染试剂，本制品利用BIOHUB公司生产的线性阳离子聚合物,按照符合GMP认证管理体系下，采用药用规格原辅料生产，所用起始材料及所需化学品和配制过程均在无菌环境中操作进行，以确保制造过程中每个步骤的特性、效力、纯度和安全性的一致性 。并严格控制重金属残留、细菌内毒素残留等，生产工艺符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程，保障生产过程及所有原辅料可追溯。
推荐：BIOHUB Polyethyleneimine PEI PRO(GMP)
1.PH值检测通过中国药典 2020 版第四部 pH 值测定法(通则 0631)
2.检测遵循《人用基因 总论-中国药典 2020》国家药典委。
3.检测遵循USP Chapter, Ancillary Materials for Cell, Gene, ａnd Tissue-Engineered Products 用于细胞 ，基因 和组织工程产品中的辅料。
4.细菌内毒素检测符合中国药典2015版四部通则（1143）方法2光度测试法（动态浊度法）
5.重金属残留检测符合国药典 2020 版第四部重金属检查法(通则 0821)
9.严格遵循以下规范生产 1. ISO 9001:2015, certified facility。
10.严格按照《GMP 附录-细胞 产品》国家药品监督管理局。
一、贴壁细胞转染 以 6 孔板转染 293T 细胞为例：
（一）转染准备
1) 转染一天：用胶原酶消化细胞并计数（不建议用胰酶）。 按照每孔2×10 6的细胞量接种293T 至 6 孔板(每孔加入 2ml 新鲜的 DMEM:F12+5%FBS 完全培养基和 1ml 的细胞悬液)置于 37°C,5%CO2培养 箱培养 24h。
2) 24h 后,移除之培养基，每孔加入 2ml 新鲜的 DMEM:F12+5%FBS。
注意：确保 293T 细胞生长状态良好传代 不超过 15 代。
（二）转染过程
3) 天：显微镜下检查细胞汇合度， 当细胞达到 70%到 80%的汇合度时，开始准备转染。
4) 对于每孔细胞，用 100l 无血清培养基（如 OPTI-MEMⅠ培养基）稀释 DNA 使 DNA 终浓 度为 1ug/ml（DNA/总培养体积）。
5) 对于每孔细胞，用 100μL 无血清培养基（如 OPTI-MEMⅠ培养基）稀释适当比例的适量 BIOHUB-PRO GMP 。DNA:BIOHUB-PRO GMP 的比例要依据自己实验摸索适比例。
6) 将稀释的 BIOHUB-PRO GMP转染试剂加入到稀释的质粒中（总体积 200L）轻轻混匀， 室温孵育 30 分钟。
7) 小心地将 BIOHUB-PRO GMP复合物滴加到细胞培养板每个孔中，轻轻摇动培养板混匀。注 意加入混合液时轻轻沿着孔板边缘滴入，而不是在细胞的顶部以免破坏细胞的粘附性。
8) 将培养板放入 37°C，5%CO2培养箱培养中培养 24h。
9) 天：在荧光显微镜下观察细胞转染效率，通常超过 80%的 293T 细胞在转染后的 24h 可以观察到绿色荧光。 小贴士 :建议进行不同基因转染时应对 BIOHUB-PRO GMP 和 DNA 的比例进行优化，以达到适比例， 通常筛选范围在 1:1 到 1:3 之间。如果之用过进口品牌的 PEI，用BIOHUB-PRO GMP时应适当 。
通常情况下，分别准备BIOHUB-PRO GMP， GMP和 DNA 转染溶液时其体积一般是转染每孔细胞培 养液体积总量的 1/10-1/20，如细胞培养液体积为 3ml，则稀释BIOHUB-PRO GMP及 DNA 的体积为150ul。质粒 DNA 的浓度通常为 1ug/ml（DNA 质量/细胞培养总体积）。 不同质粒种类以及大小会影响转染效率，如较大片段插入质粒可能转染效率低，可根据 实际实验需要调整，如适当增加转染质粒总量等。 HEK293 GnTI 细胞重悬浮可用枪头或移液管反复吹打，但 CHO-S 细胞的粘附性比较强 重悬浮时需要借助细胞刮刀。 一般建议用胶原酶消化细胞，如果表达的是膜蛋白，胰酶消化细胞可能会降低蛋白表达， 建议用胶原酶消化细胞。对于贴壁性低的细胞系，可用明胶或鼠尾胶铺板，增加细胞与培养皿之间的粘附性。 一旦确定了细胞类型、培养基和78BioPEI GMP与 DNA 的 比例，就可以在转染后 24 至 96 小时内多次观察转染效率，以优化 表达量时间点。
二、悬浮细胞转染 离心对数期生长的细胞用新鲜的培养基重悬浮使细胞密度达到 1×10 6cells/mL 小规模转 染时，如需大规模转染细胞密度要到达 2-3×10 6cellsml/mL，可参考文献[4]。以 293F 细胞 于 100mL 培养瓶（溶液体积占瓶体积的 1/5）操作体系举例如下：
（一）转染准备
1) HEK293F 细胞传代接种于 20mL 悬浮细胞生长培养基中(36.5℃，120rpm，5%CO2 )的条 件下培养。当细胞密度到 1X10 6cells/mL，然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4 小时 后可以进行转染。
（二）转染过程
2) 用 1mlOptiPROSFM(无血清培养基)稀释适量的 DNA，使 DNA 终浓度为 1ug/ml（DNA/总 培养体积）。混匀并静置 5min。
3) 用1mlOptiPROSFM(无血清培养基)稀释适当比例的BIOHUB-PRO GMP，混匀并静置 10min。
（78BioPEI：DNA 参考比例范围，可参考上述贴壁细胞BIOHUB-PRO GMP和 DNA 优化方案优化）。
4) 将BIOHUB-PRO GMP转染试剂加入到稀释的质粒中轻轻混匀，室温孵育 30 分钟。
5) 将BIOHUB-PRO GMP转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床 （36.5℃，5%CO2，120rpm）。
6) 基因表达可在 24-72 小时后检测，具体时间取决于细胞系和转基因.
小贴士:在悬浮培养中，单个细胞的转染效率要高于聚集在一起的细胞，需要优化适合单细胞的 生长条件。 方形瓶应经过两个连续的干燥循环高压灭菌（每个 45 分钟，干燥 15 分钟） 盖子应尽可能松，不得脱落。应该让它们冷却拧紧盖子，将其完全放入层流罩中。如 果瓶子向内塌陷，细胞将无法正常生长。 如果要获得更多的蛋白产量，有参考文献表明转染后 24 小时，可以适当稀释细胞，稀 释比例参考范围（1:2—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与 稀释比率应根 据经验确定, 可以把 DNA 和BIOHUB-PRO GMP 转染试剂直接加入到细胞悬液中进行转染，但必须经过上述 特定流程的 DNA 和转染试剂的比例和用量的相应优化。
-
不同质粒种类以及大小会影响转染效率，可如较大片段插入质粒可能转染效率低，可根据实际实验需要调整，如适当增加转染质粒总量等。
-
细胞状态及代数会较大程度影响转染。刚复苏细胞需传代2-3次以上，待细胞生长稳定后做转染实验。为保证实验稳定性，转染细胞尽量选择20代以内进行实验。
-
对于贴壁性低的细胞系，可用明胶或鼠尾胶铺板，增加细胞与培养皿之间的粘附性。
-
初次使用应优化DNA浓度和 BIOHUB-PRO GMP试剂量以得到 的转染效率。 DNA 和转染试剂的比例， 通常推荐是1:2-1:3，通过调整DNA/BIOHUB-PRO GMP转染试剂比例优化转染效率，调整范围DNA（μg）:BIOHUB-PRO GMP（μL） 比值在1：0.5-1：5。
-
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
凡在本公司购买ELISA试剂盒，可提供免费待测服务，视样本数量而定出结果时间，一般一周内出检测结果！科研ELISA是上海笃玛生物的主营产品，科研ELISA栏目提供该类目产品说明书以及提供产品报价与网上订购。上海笃玛生物科技有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的业化生物工程公司。公司具有完善的实验技术开发平台，成熟的抗原、抗体研发系统，熟练掌握各种酶联技术，结合公司的研发团队，可以有效的保证公司产品强的稳定性和高的准确性，同时又具有竞争力的价格。公司目主要提供生化试剂、分子生物学试剂及试剂盒，各种抗体及免疫学试剂盒、实验耗材等多门类上万种产品，产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个域。
