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液体样本甘油含量酶法测定试剂盒
描述：甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能够水解血
液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素
敏感脂肪分解酶能够水解脂肪细胞中的甘油三酯。 与游离脂
肪酸一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，
但检测更加方便。 本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法与经典的
GPO-Trinder 酶学反应方法，通过比色测定液体样本中的甘
油含量。经过优化后，操作步骤更加简单，检测线性范围在
10-1200µ mol/L，可靠性和重复性俱佳，适合生物医学、食
品实验室检测。
原理： 在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化为 3-磷酸甘油，
再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢； 在过氧化物酶作用
下生色底物转化为苯醌亚胺，其光密度值与甘油浓度成正
比。
适用范围：测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘
油浓度。
组成 ：
(1) R1 试剂 40 ml
(2) R2 试剂 10 ml
(3) 4 mmol/L甘油标准品 1 ml
4 ºC，储存 3 月。
所需设备：酶标仪、生化分析仪或 721、722 型可见光分光
光度计。最佳工作波长 550nm，如无此波长建议优先选用
570nm、次选 530、490nm。
一 样本处理：
1. 酒类、饮品、清澈液体样本：可直接进行测定，如超过
线性范围可用蒸馏水或生理盐水稀释后再进行测定。
2. 培养液：取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基，
如有细胞碎片应 4ºC,， 12,000g 离心 5min,取上清进行测
定。
3. 血液：对于新鲜抗凝血而言，可 4ºC，2,000g离心5min
得到血浆；而对于非抗凝血来说，可先 4ºC 静置 2h 得
到血清后，2000g离心10min,除去血细胞。将得到的血
浆/血清 70ºC 加热 10 分钟灭活內源脂肪酶，12,000g
离心 10min ,去上清进行测定或-20ºC 保存。
二 工作溶液配制：按4:1 比例，取 4 ml 试剂 R1 与1 ml 试
剂 R2 混合即可， 立即使用或4ºC 保存<1 天，变色弃去。
三 标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致
的液体，将 4 mM 甘油标准品倍比稀释为 1000、500、
250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µ mol/L，通常
取其中 4~6 管即可，注意设置0 浓度对照反应管。
四 甘油浓度测定：
1. 参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致，减小实验
误差，可先加入标准品、待测样品，然后再加入工作溶
液。（注意：当甘油浓度较低时，可将待测样品与工作
溶液按照 100µl:100µl 体积进行混合，然后再进行测定，
但是如果样品体积超过 100µl时将会稀释工作液中酶
的浓度，致使反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过
线性范围的时候，可进行适当稀释，然后根据稀释倍数
来计算样品中甘油浓度。）
2. 37ºC 或25ºC 反应 10 分钟。 反应平衡后颜色在 60 分钟
内稳定。
3. 先用蒸馏水+工作液的空白管调零，然后测定各管 OD
值。
4. 绘制标准曲线并计算甘油浓度。
附 Excel 作图步骤：各标准管 OD 值为 y轴，标准品浓
度为 x 轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选
择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一
点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-
和-R2
值-。
表一：
酶标微板测定的加样比例（检测范围 10-1200µmol/L）
（可对样品和工作液比例进行微量调整）
低浓度甘油样品测定 高浓度甘油样品测定
空白管 标准品 样本管 空白管 标准品 样本管
蒸馏水 µl 50 5
标准品 µl 50 5
样品 µl 50 5
工作液 µl 150 150 150 195 195 195
表二：
1 ml 比色杯测定的加样比例（检测范围 10-1200µmol/L）
低浓度甘油样品测定 高浓度甘油样品测定
空白管 标准品 样本管 空白管 标准品 样本管
蒸馏水 µl 200 50
标准品 µl 200 50
样品 µl 200 50
工作液 µl 600 600 600 750 750 750
说明：
1. 维生素C>0.18g/L、血红蛋白>2g/L、胆红素>0.25g/L、二硫
苏糖醇、巯基乙醇、高浓度EDTA干扰测试。
2. 正常血清甘油浓度为20-130µ mol/L，细胞培养时须用不含酚
红的无色无血清培养基，如果培养基中含有酚红，可以选择
含有酚红的无细胞培养基作为对照进行测定。
参考文献：
1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D ａnd Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
