elisa试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检查试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫剖析试剂盒、酶免试剂盒等,对比常见的叫法是ELISA检查试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。ELISA试剂盒自从60-70时代面世以来,得到全世界科研工作者的认可及推重,在欧美及我国取得很大的推行,尤其是国内生化范畴的长足发展。今日小编着重带您了解ELISA试剂盒的包被!
提到ELISA包被,也许大多朋友们重视的是包被的时刻与温度。直接包被的抗原经固相抗体的亲和层析效果,包被在固相上的抗原纯度大大进步,因而含杂质较多的抗原也可选用捕获包被法,实验的特异性、敏感性均由此得以改进,重复性亦佳。
蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附联系的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的效果于。可将聚苯乙烯板先经紫外线照耀,以增加其吸附功能。例如,在检查抗DNA抗体时,需用DNA作为包被抗原,而遍及的固相载体一般不能直接与核酸联系。换言之,包被便是抗原或抗体联系到固相载体外表的进程。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时,抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充沛露出,在这种情况下,直接包被效果欠安,能够选用直接的捕获包被法,即先将针对该抗原的特异抗体作预包被,这以后经过抗原抗体反响使抗原固相化。也可用亲和素生物素体系作直接包被,即用亲和素先包被载体,然后参加生物素化的DNA,这种包被办法均匀、结实,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。
IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力,其联合多发生在Fc段上,抗体联系点露出于外,因而抗体的包被一般均选用直接吸附法。直接包被的另一优点是抗原用量少,仅为直接包被的1/10乃至于/100,这种物理吸附对错特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,抗心磷脂抗体的ELISA试剂盒一般选用这种包被方法。固相载体先用碱性蛋白质,如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被,也可进步核酸的联系力。
ELISA试剂盒脂类物质无法与固相载体联系,可将其在有机溶剂中溶解后参加ELISA板孔中,开盖置冰箱过一夜或凉风吹干,待酒精挥发后,让脂质天然干固在固相外表。载体对不一样蛋白质的吸附才能是不相同的,大分子蛋白质较小分子蛋白质一般富含更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体外表。此直接联系在固相上的抗原远离载体外表,其抗原决定簇也得以充沛露出。